吖啶橙染色方法-吖啶橙染色细胞自噬图片

一、常用的染色方法有革兰氏染色(最基本)、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等。

二、.1 革兰染色法 （1）取含金**葡萄球菌和大肠埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定;（2）染色:用结晶紫染液染1min，水冲洗;卢戈碘液染1min，水冲洗;0.4%复红酒精溶液染30s，水冲洗;（3）吸干后镜检［2］ 。

1.2 抗酸染色法 （1）取结核杆菌阳性的痰标本（已处理）涂片、干燥、固定。（2）染色:将石炭酸复红染液沸水浴10min，滴加2～3滴覆盖菌膜染色 5min，水冲洗，3%盐酸酒精脱色30s，水冲洗;碱性美兰复染30s，水冲洗。（3）吸干后镜检［3］ 。

1.3 荚膜染色法 （1）取接种肺炎球菌亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定;（2）染色:用石炭酸复红染液染1min，水冲洗;95%酒精脱色5s水冲洗;20%鞣酸溶液媒染10min水冲洗;0.8%孔雀绿溶液染色1min，水冲洗;（3）吸干后镜检［4］ 。

1.4 芽胞染色法 （1）取等量破伤风杆菌厌氧培养菌液和5%孔雀绿水溶液，放入小试管中充分混合，沸水浴20min;取上述混合液涂片、干燥、固定;（2）用 1%沙黄液复染10min，水冲洗;（3）干后镜检。

2.1 革兰染色 镜下，金**葡萄球菌染成紫色、球形，为革兰阳性菌;大肠埃希菌染成红色、杆状，为革兰阴性菌。革兰染色法是细菌学中最经典，应用最广泛的染色法之一。脱色是影响革兰染色的关键步骤，脱色时间长短直接关系到染色结果的准确性［5］ 。脱色过度则革兰阳性菌可能被误染为革兰阴性菌，脱色不 够则革兰阴性菌可能被误染为革兰阳性菌，为此学生难以把握。现将原有四步染色法改为三步法，即把第三步酒精脱色和第四步复红复染合并一步进行，使用 0.4%复红酒精溶液作为复染剂，可达到脱色和复染双重目的。这样，就可以避免学生在四步法中因脱色时间不易掌握而造成染色的失败，减少重复性实验，提高了教学效果。

2.2 抗酸染色 镜下，结核分枝杆菌染成红色，为抗酸菌;背景和其他菌被染成蓝色，为非抗酸菌。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上，用玻片夹夹住涂片以微火烟叶热，保持染液冒蒸汽约5min，此法学生容易使染液蒸干或使染液沸腾，从而影响染色效果和污染环境。改良后的方法是将染液直接加热改为水浴后使用，克服上述的缺点，且染色效果良好。适合实验教学使用。

2.3 荚膜染色 镜下，肺炎球菌菌体染成红色（成双排列），荚膜染成绿色，存在于菌体的周围。传统的荚膜染色是用结晶紫染液染色，菌体染成紫色，荚膜染成淡紫色或无色，菌体和荚膜之间反差小，不易分辨。改良后，增加了脱色、媒染、复染的步骤，使菌体和荚膜之间反差增大，易于观察，可用于学生实验和示教片的制作。

2.4 芽胞染色 镜下，破伤风杆菌的菌体染成红色，芽胞染成绿色。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上并弱火加热，使染液冒蒸汽约5min，此法染液用量大，且容易污染衣物和实验台。现改为菌液和染液混合水浴加热初染，然后制备涂片、固定、复染，即节约时间，染液消耗又少，且菌体、芽胞对比鲜明。此法适用于教学标本片的制作。

三、简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

操作步骤

1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。

2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。

3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。

4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。

5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。

6．干燥

7．镜检

caspase是什么

电泳后，核酸需经染色才能显色出带型，常用以下核酸染色剂：

1、溴化乙锭（ethidium bromide, EB）

最常用的核酸荧光染料，可嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCl2中5min，使非结合的EB褪色，这 样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测单链DNA或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。

在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB，染色可在电泳过程中进行，能随时观察核酸的迁移情况。但EB带正电荷，嵌入碱基后增加了 核酸分子的刚性，使迁移率减慢，故不宜用于测定核酸分子量的大小，这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色。EB见光 易分解，应于4℃避光保存，

2、吖啶橙（acridine orange, AO）：

吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。

3、银（Ag+）试剂：

Ag+与核酸形成稳定复合物，然后用甲醛使Ag+还原成银颗粒。AgNO3等试剂可使聚丙烯酰胺凝胶上的单链，双链DNA及 RNA都染成黑褐色。银染法的灵敏度比EB染色高200倍左右，比亚甲蓝染色高100~1000倍，在小于0.5mm厚的凝胶中，能检测出0.5ng的 RNA，其缺点是专一性不强，能与蛋白质，去污剂反应也产生褐色，而且对DNA的染色定量不准确。银与DNA稳定结合，对DNA有破坏作用，不适于DNA 片段回收的制备。

4、亚甲蓝（methylene blue）

可将RNA染成蓝色，但灵敏度不高，而且操作时间长。染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼可见，最低检测量为 250ng。

吖啶橙染色的叶绿体和细胞核颜色分别是什么

caspases是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶。它们的活性位点均包含半胱氨酸残基，能够特异性切割靶蛋白天冬氨酸残基后的肽键。因此caspases意为“天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶”。caspases负责选择性地切割某些蛋白质，切割的结果是使靶蛋白活化或失活，而非完全降解。

请教哪些操作方法区别单链DNA与单链RNA

叶绿体发出桔红色荧光,细胞核可发出绿色荧光。根据查询公开信息显示，吖啶橙是一种荧光色素,与细胞中 DNA 和 RNA 结合量存在差别,可发出不同颜色的荧光(即着色特异性),这是由于DNA是个高度聚合物,吸收荧光物质的位置较少,发绿色荧光,而RNA 聚合度低,能和荧光物质结合的位置多,故发红色荧光。

荧光染料与多少dna结合肉眼可见颜色变化

哪些操作方法区别单链DNA与单链RNA

方法1：DNA溶于苯酚，RNA不溶，故可用苯酚来沉淀，这是最简单的方法。

方法2.：利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。

碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。

小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法

(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。

(2).去除结缔组织及，剪碎肿块。

(3).小碎片移入1.20×38mm针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。

(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。

(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。

注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。

2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析

(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。

(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。

(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。

3. 完整细胞DNA的PI染色

(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。

(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。

（二）吖啶橙染色

1. DNA和RNA的鉴别染色

利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：

1）试剂：

（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。

Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL?

1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P