吖啶酯类化合物标记的化学发光免疫测定-吖啶酯类化合物
摘要:免疫诊断是体外诊断的一种,它主要应用免疫学来诊断各种疾病和测定免疫状态。免疫诊断通过抗原抗体结合反应测定人体内物质,主要包括放射免疫分析(RIA)、酶联免疫分析(ELISA)、化学发光免疫分析(CLIA)及胶体金标记免疫分析(GICT)四各方面。免疫诊断可用于检测免疫器官和功能发生改变的疾病、由免疫机制引起的疾病及一些内分泌性的疾病。下面一起来了解一下免疫诊断包括哪些方面吧。一、什么是免疫诊断
免疫诊断是应用免疫学的理论、技术和方法诊断各种疾病和测定免疫状态的一种诊断方法,在医学上,它是确定疾病的病因和病变部位,或是确定机体免疫状态是否正常的重要方法。
二、免疫诊断包括哪些方面
免疫诊断主要通过抗原抗体结合反应测定人体内物质。根据技术手段与诊断原理不同,免疫诊断可细分为放射免疫分析(RIA)、酶联免疫分析(ELISA)、化学发光免疫分析(CLIA)及胶体金标记免疫分析(GICT)四类:
1、放射免疫分析
用放射性同位素标记抗原与非标记抗原(或待测抗原),使二者同时竞争有限数量的特异性抗体并与抗体发生“抗原-抗体反应”,以推断非标记抗原(或待测抗原)数量的技术。由于放射性免疫分析含有放射性同位素并造成环境污染,正逐步被市场淘汰。
2、酶联免疫分析
利用抗原与抗体特异性结合所产生的专一性键结,配合酵素呈色,通过颜色变化以定性或定量推断待测抗体或抗原数量的技术。酶联免疫分析优点为通量大、检测速度快、操作简单、成本低廉,适用于大批量标本测定,普遍应用于人体疾病的普查和初筛(如HIV筛查、传染病筛查)。
3、化学发光免疫分析
借助高灵敏度的化学发光试剂(如吖啶酯类化合物),标记抗原或抗体的技术。化学发光免疫分析灵敏度高、特异性强,检测时间快。但是分析试剂的研制难度大,成本投入高。
4、胶体金标记免疫分析
借助氯金酸在氧化还原反应及静电作用下形成的稳定胶体状态(如胶体金),将胶体金与抗原抗体结合以标记抗原或抗体的技术,在临床上常用于快速检测。
三、免疫诊断可用于检测什么
从免疫学的角度,免疫诊断可应用于:
1、检查免疫器官和功能发生改变的疾病:如免疫缺陷病、自身免疫病。
2、由免疫机制引起的疾病:如输血反应、移植排斥反应。
3、一些内分泌性的疾病:从临床学的角度来说,免疫诊断可应用于检查传染性疾病、免疫性疾病、肿瘤和其他临床各科疾病。
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化学发光反应要满足什么条件
发光有两种,一种是由于温度达到条件而发光,一种是冷光,也就是是荧光.高于绝对零度的物体都会向周围空间发射电磁波,温度越高发射的电磁波的波长越短.当波长范围落在可见光范围内时就会发光.另外,高速运动的物体也会发射波长较短的电磁波.一般化学发光要么是温度的关系(大部分情况是燃烧),要么就是荧光反应---发光基团吸收能量使电子跃迁到高能级,在一定条件下释放电磁波的现象
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化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子(hM),利用发光讯号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上,或酶作用于发光底物。化学发光免疫分析根据其所采用的标记物的不同可分为发光物标记、酶标记和元素标记化学发光免疫分析三大类。发光物标记的CLIA是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物(如吖啶酯),在反应体系中发光物质在碱性介质中氧化时释放大量自由能,产生激发态的中问体,该激发态的中间体由最低振动能级回到稳定的基态,各个振动能级产生辐射时,同时产生能量,多余的能量即为发射光子,从而产生发光现象。利用发光讯号的测量仪器,分析接收的光量子产额,通过计算机系统转换成被测物质的浓度单位。在此系统中包含两个部分,化学发光反应系统和免疫反应系统,即在抗原一抗体特异性反应过程中,伴随有化学反应过程而产生光的发射现象。化学反应系统中以化学反应为基础,化学发光的首要条件是吸收了化学能而处于激发态的分子或原子必须能释放出光子或者能将能量转移到另一个物质的分子上并使这种分子激发,当这种分子回到基态时释放出光子。化学发光与荧光的根本区别是形成激发态分子的激发能原理不同。荧光是发光物质吸收了激发光后使分子产生发射光;化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发产生的发射光。因此,化学发光反应过程必须产生足够的激发能是产生发光效应的重要条件。化学发光反应可在气相、液相或固相反应体系中发生,以液相发光在免疫学检测中最常应用。
发光有两种,一种是由于温度达到条件而发光,一种是冷光,也就是是荧光。高于绝对零度的物体都会向周围空间发射电磁波,温度越高发射的电磁波的波长越短。当波长范围落在可见光范围内时就会发光。另外,高速运动的物体也会发射波长较短的电磁波。一般化学发光要么是温度的关系(大部分情况是燃烧),要么就是荧光反应---发光基团吸收能量使电子跃迁到高能级,在一定条件下释放电磁波的现象
化学中..置换反应要满足哪些条件?
置换反应也就是氧化还原的一种,单质和一种化合物生成另一种单质和化合物,一般都是金属来置换另一种金属,只需比较反应物金属的还原性,可以根据周期表的规律或K,CA,NA,MG,AL。。。。
辣根酶催化鲁米诺化学发光反应?消毒液啊~漂白剂啊~~拿这之类的东西好好地洗一遍有血的东西就能 干扰 鲁米诺鉴定。 所以说想干坏事一定要好好蓄谋。 以下摘自百度百科: 鲁米诺的缺点 1、鲁米诺在铜、含铜合金、辣根或某些漂白剂的存在下发出荧光。因此如果犯罪现场被漂白剂彻
置换反应要满足哪些条件?一种单质与一种化合物反应,生成另一种单质和另一种化合物的反应叫做置换反应,
只有当一种单质和一种化合物反应能产生气体或沉淀或水,这个反应就认为可以发生.
最典型的置换反应就是金属单质与稀酸生成氢气的反应。
置换反应发生的条件:
1.金属+酸:金属活动顺序H前金属可以置换酸中的H,酸不能是硝酸和浓硫酸 。
2.金属+盐:金属活动顺序前换后,盐必须是可溶盐。
3.H2和C与金属氧化物:条件是加热或高温。
常见的化学发光反应体系有那些?最常见的是鲁米诺及其衍生物-过氧化氢体系
其次,吖啶脂类如光泽精-过氧化氢体系
二氧杂环丁烷类如AMPPD在碱性磷酸酶ALP的催化下分解
然后,还有过氧化草酰酯+染料体系,钌联吡啶+TPA体系等等。
除此之外还有很多,像鲁米诺体系里的氧化剂未必只有过氧化氢,还有高锰酸钾、Br2、甲醛等等。催化剂也可以是过氧化物酶或者过渡金属离子
还有就是诸如乙醇蒸汽、异丙醇蒸汽这些,在奈米金属粒子上也是可以产生催化化学发光的。
化学发光 电化学发光应该是吧 发光都是电化学方面的~
标记用的化学发光剂应符合什么条件应满足:
能参与化学发光反应;与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂;偶联后仍保持高的量子效应和反应动力;应不改变或极少改变被标记物的理化性质,特别是免疫活性。
化学发光化学发光是指物质在进行化学反应时,由于吸收了反应时产生的化学能,而使反应物产物分子激发至激发态,受激发分子由激发态回到激发态时,便发出一定波长的光。
高锰酸钾是化学发光反应中常用的强氧化剂,它可以和分子结构中含有多个羟基或氨基的有机物发生化学发光反应。
化学发光免疫分析仪中国有几家在生产?都是什么情况?
现在国产的有:1.深圳新产业(半自动做得一半,最近因全自动上市而日渐兴起)。2.北京源德(半自动设备在国内保有量很大,全自动在12年也上市了)。3.北京贝爱康(国内磁微粒发光法的典范,已经被源德收购)。4.北京科美东雅(半自动处在中游水平,全自动只是全自动加样加上了半自动发光组合而成,不是真正意义上的全自动,目前市场很一般)5.新波(国内时间分辨发光的代表《做时间分辨的还有个广州丰华,但市场表现比不上新波》,乙肝项目国内市场做的非常好,目前被PE收购)。6.郑州安图(安图生物技术基础一般,但是做市场的能力全国一流!设备水平一般,但是参数都做的很牛。目前市场总体做的不错,全自动也即将上市)。7.威海威高(半自动做的很烂,最近上市了200速的全自动,设备很大很漂亮,但是试剂情况以及实际使用情况还不明了,市场总体表现目前一般)。8.北京泰格科信,老牌的发光厂家(其试剂批号很全,甚至有批号但是做不出来试剂!技术水平一般,市场混乱,日益走低)。9.四川迈克(新上市的全自动,但是试剂种类非常少!目前还没有见过用户)。10.另外还有一些如北京大成、河北的康普生(只生产设备)等一些小厂家!
市场总体如此,写的比较简单,详细的可以私信我交流。
免疫诊断可用于检测什么
现在国产的有:
深圳新产业(半自动做得一半,最近因全自动上市而日渐兴起)。
北京源德(半自动设备在国内保有量很大,全自动在12年也上市了)。
北京贝爱康(国内磁微粒发光法的典范,已经被源德收购)。
北京科美东雅(半自动处在中游水平,全自动只是全自动加样加上了半自动发光组合而成,不是真正意义上的全自动,目前市场很一般)。
新波(国内时间分辨发光的代表《做时间分辨的还有个广州丰华,但市场表现比不上新波》,乙肝项目国内市场做的非常好,目前被PE收购)。
郑州安图(安图生物技术基础一般,但是做市场的能力全国一流!设备水平一般,但是参数都做的很牛。目前市场总体做的不错,全自动也即将上市)。
威海威高(半自动做的很烂,最近上市了200速的全自动,设备很大很漂亮,但是试剂情况以及实际使用情况还不明了,市场总体表现目前一般)。
北京泰格科信,老牌的发光厂家(其试剂批号很全,甚至有批号但是做不出来试剂!技术水平一般,市场混乱,日益走低)。
四川迈克(新上市的全自动,但是试剂种类非常少!目前还没有见过用户)。
另外还有一些如北京大成、河北的康普生(只生产设备)等一些小厂家。
分类:
化学发光标记免疫分析法:
化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester (A E) ,是有效的发光标记物[ 3 ] , 其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法 ,大分子抗原则采用夹心法 , 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。
发光酶免疫分析法:
从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析( chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同[ 5 ]: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) ,它们有各自的发光底物。
鲁米诺试剂在不同化学检测中有哪些应用?
摘要:免疫诊断是体外诊断的一种,它主要应用免疫学来诊断各种疾病和测定免疫状态。免疫诊断通过抗原抗体结合反应测定人体内物质,主要包括放射免疫分析(RIA)、酶联免疫分析(ELISA)、化学发光免疫分析(CLIA)及胶体金标记免疫分析(GICT)四各方面。免疫诊断可用于检测免疫器官和功能发生改变的疾病、由免疫机制引起的疾病及一些内分泌性的疾病。下面一起来了解一下免疫诊断包括哪些方面吧。一、什么是免疫诊断
免疫诊断是应用免疫学的理论、技术和方法诊断各种疾病和测定免疫状态的一种诊断方法,在医学上,它是确定疾病的病因和病变部位,或是确定机体免疫状态是否正常的重要方法。
二、免疫诊断包括哪些方面
免疫诊断主要通过抗原抗体结合反应测定人体内物质。根据技术手段与诊断原理不同,免疫诊断可细分为放射免疫分析(RIA)、酶联免疫分析(ELISA)、化学发光免疫分析(CLIA)及胶体金标记免疫分析(GICT)四类:
1、放射免疫分析
用放射性同位素标记抗原与非标记抗原(或待测抗原),使二者同时竞争有限数量的特异性抗体并与抗体发生“抗原-抗体反应”,以推断非标记抗原(或待测抗原)数量的技术。由于放射性免疫分析含有放射性同位素并造成环境污染,正逐步被市场淘汰。
2、酶联免疫分析
利用抗原与抗体特异性结合所产生的专一性键结,配合酵素呈色,通过颜色变化以定性或定量推断待测抗体或抗原数量的技术。酶联免疫分析优点为通量大、检测速度快、操作简单、成本低廉,适用于大批量标本测定,普遍应用于人体疾病的普查和初筛(如HIV筛查、传染病筛查)。
3、化学发光免疫分析
借助高灵敏度的化学发光试剂(如吖啶酯类化合物),标记抗原或抗体的技术。化学发光免疫分析灵敏度高、特异性强,检测时间快。但是分析试剂的研制难度大,成本投入高。
4、胶体金标记免疫分析
借助氯金酸在氧化还原反应及静电作用下形成的稳定胶体状态(如胶体金),将胶体金与抗原抗体结合以标记抗原或抗体的技术,在临床上常用于快速检测。
三、免疫诊断可用于检测什么
从免疫学的角度,免疫诊断可应用于:
1、检查免疫器官和功能发生改变的疾病:如免疫缺陷病、自身免疫病。
2、由免疫机制引起的疾病:如输血反应、移植排斥反应。
3、一些内分泌性的疾病:从临床学的角度来说,免疫诊断可应用于检查传染性疾病、免疫性疾病、肿瘤和其他临床各科疾病。
使用酶促发光底物的是
鲁米诺试剂最开始的应用是用来检测蛋白质的。在蛋白印迹法(western blot)中,经常会用到连接了酶的抗体来结合待检测的蛋白质,而鲁米诺化学发光试剂与酶(过氧化物酶)配合使用可以让局部发光,把蛋白质的位置显示出来。图中的发光非常明亮,应该是因为试剂里加了化学发光增强剂。当然实际检测蛋白质的时候发光远没有这么亮。
另外将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺(ABEI)标记到羧酸和氨类化合物上,经过高效液相色谱(HPLC)或液相色谱(LC)分离后,再在碱性条件下与过氧化氢-铁氰化钾反应进行化学发光检测,如将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母RNA后,通过离心和透析分离,然后进行化学发光检测。
德晟目前的化学发光试剂包含吖啶酯、鲁米诺等,品质有保证货源充足。
使用酶促发光底物的是酶促反应发光剂。
酶促反应化学发光是利用标记酶的催化作用,使发光剂(底物)发光,这一类需酶催化后发光的发光剂 称为酶促反应发光剂。酶促化学发光灵敏度高,但速度慢,酶活性容易受外界影响,其代表性的发光物质有鲁米诺及其衍生物、AMPPD。
化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用,直接参与发光反应,它们在化学结构上有产生发光的特有基团,可直接标记抗原或抗体。直接化学发光速度快、试剂稳定性好,但灵敏度略低于酶促发光。代表性的发光剂有:吖啶酯、三联吡啶钌。
特点:
1、发光反应中在形成电子激发态中间体之前,联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从吖啶环上脱离开来,即未发光部分与发光部分分离,因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。
2、吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物化学发光不需要催化剂,在有H2O2 的稀碱性溶液中即能发光。因此应用于化学发光检测具有许多优越性。
优点主要有:
1、背景发光低,信噪比高。
2、发光反应干扰因素少。
3、光释放快速集中、发光效率高、发光强度大。
4、易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少。
5、标记物稳定(在2-8 ℃下可保存数月之久)。
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