吖啶酯标记方法-吖啶酯怎么读

2024-11-09 08:33:24

吖啶酯标记方法-吖啶酯怎么读

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，许多大中型城市，乳腺癌已居女性恶性肿瘤亡率的首位。乳腺癌复发转移是导致乳腺癌患者亡的最主要原因，淋巴结阴性的患者中约有24%～30%出现复发转移，淋巴结阳性的患者中复发转移率高达50%～60%，而转移性乳腺癌的5年生存率仅为26%。

萤火虫荧光素酶（Luciferase）是一种常用的信号分子，可以用来标记肿瘤细胞.

一．细胞方法

将带有荧光素luc转酶报告基因的真核表达重组质粒pRc/CMV2-7，利用G418筛选，获得稳染人乳腺癌细胞株MCF-7-luc，并在稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆MCF-7体外评价其发光能力。通过建立裸鼠移植瘤模型，利用活体生物发光成像系统检测肿瘤生长及转移情况，为下一步监测裸鼠移植瘤对药物作用的变化情从而为分析药物对肿瘤的治疗效果提供理想的状况.

G418筛选浓度的确定：

37℃细胞培养箱中常培养,G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml设置6个浓度梯度。在细胞接种24h后，加入6孔板中，每个浓度设2个孔在10～14d内全部亡。每天观察细胞生长情况，亡最低的G418浓度，即为筛选质粒转染克隆MCF－7细胞的浓度。

1)细胞转染

取对数生长期的MCF－7细胞，将细胞接种于6孔板内待细胞融合度达到80%～90%孔培养板中，TM即可转染。按照Lipofectamine2000试剂盒操作指南进行转染。在250μl无血清、无双抗的DMEM培培养基中加入luc质粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl无血清、无双抗的DMEM培养基中加入10μlLipofectamineTM2000，室温培育5min。将上述2种稀释液混匀，室温培育30min后加入细胞孔板中，置于培养箱常规培养。

转染24h后胰酶消化细胞并按1∶6比例接种到新6孔板中，同时加入实验确定的浓度G418，随后每2d更换一次培养基并维持G418筛选直至单细胞抗性克隆的出现。分别挑选单一抗性克隆至96孔板，待其逐渐增殖后转入24孔板中继续传代培养。

3)荧光素酶活性鉴定阳性克隆

单一抗性克隆传代至第五代时用LuciferaseAs-sayAystem检测荧光素酶活性。检测时，各克隆按1×105个/孔接种到24孔板，24h后细胞裂解液裂解12000rpm，4℃离心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl荧光素酶96microplateluminometer连续读底物，停留2s后，取10s的荧光值（RLU），每个克隆设3个复孔，保留RLU值高的细胞克隆继续传代培养，再过5代后进行荧光素酶活性检测。保留RLU值维持较高的克隆直至第30代，荧光素酶活性最高的几个克隆MCF-7-luc即为阳性克隆.

各不同数量细胞克隆的荧光值检测7-luc阳性克隆细胞按细胞数将筛出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分别接种到96孔黑板中，另外一组仅有细胞，一组仅有培养基作对照，设置2个复孔，常规培去上清并用PBS洗两次，每孔加入100μl养24h后，Luciferin使其终浓度为150μg/ml，PBS，再加入D-立即用活体成像系统检测，分析发光强度与细胞数之间的相关性。

4)细胞生长曲线绘制

MCF7-luc细胞和作为对照取表达荧光素酶的MCF-7细胞，接种于24孔板，接种密度为2×104/孔。细胞接种后1～7d，每天胰蛋白酶消化其中3孔细胞，用细胞计数仪测定细胞数。以细胞生长天数为横坐标，细胞数目为纵坐标，分别绘制两种细胞生长曲线。

二．动物模型

BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠，4～5周龄，体重（15±2）g，雌雄各3只。取对数生长期的MCF-7用PBS重悬为2．5×10/ml悬液，每只裸鼠左右背侧近腋部皮下接种100μl，共接种6只。接种后第5d采用德国BERTHOLD公司的活体成像系统检测信号强度。以后每5d观测一连续观测30d。观测前每只裸鼠戊巴比妥钠麻醉（计量为：35mg/kg体重），按150mg/kg体重的量腹腔注射luciferin（invivograde），10min后，进行活体成像观察皮下肿瘤的生长情况，定量分析各时间点的荧光值。绘制肿瘤皮下生长曲线.

MCF-7-luc细胞裸鼠皮下移植瘤的病理形态学观察

MCF-7-luc细胞裸鼠皮下接种后25d，脱颈处小鼠，取肿瘤组织，制成石蜡切片，切片厚度为3μm，经HE染色后观察细胞的病理形态学。

活体动物成像技术是近期发展起来的一种新型稳定可靠,是检测动物体内分子及细胞事件的影像检测技术，强有力手段。利用生物发光成像（BLI）可以对活体病灶的大小进行无损伤直观准确检测。

我们有自己的独立有机合成实验室，可以生产合成各种化学发光试剂，我们可以提供化学发光试剂、化学发光底物、发光标记物、发光增强剂、染料探针类、微生物和酶的显色底物以及体外诊断试剂。

检验技师考试免疫学考点总结

　creatine kinase-MB，即是ck mb，那它的意思是?下面是我给大家整理的ck mb是什么意思，供大家参阅!

ck mb是什么意思

　肌酸激酶同工酶

　例句：

　1. In the past we relied on creatine kinase or the MB fragment of creatine kinase.

　过去我们依靠肌酸激酶或肌酸激酶MB(CKMB) 片段进行诊断.

　2. Objective To investigate the clinical significance of serum creatine kinase ( CK ) and its isoenyme ( CK - MM ) through observing their dynamic change.

　目的观察创伤患者血清肌酸激酶 ( CK ) 及其同功酶 ( CK-MM ) 的动态变化,探讨其临床意义.

　3. There may be features of autonomic instability, and serum creatine kinase ( CK ) may be elevated.

　可能有自主神经症状, 血清肌酸激酶可能升高.

ck mb英文注解

　中文名称：肌酸磷化脢-同功脢MB

　临床用途：CK-MB 是 CK 的同功脢之一，大部份都来自於心肌，是非常重要的心肌指标。临床将它当作急性心肌梗塞 (AMI) 的辅助诊断工具，也用在心肌梗塞发作後血栓溶解治疗的监控指标。

　CK (Creatine kinase) 可分成三种同功脢，CK-BB、CK-MB、CK-MM。CK-BB 大多存在於脑中，CK-MB 则以心肌含量最多，CK-MM 在骨骼肌中占 90%。因此 CK-MB 对心肌有较高的特异性，特别在急性心肌梗塞 (AMI) 发作时会大量分泌到血液当中。CK-MB 会在心肌梗塞发生後 4 ~ 6 小时上升，24 小时达到最高点，3 天内恢复正常。严重 AMI 发生时，CK 及 CK-MB 都会上升;若只有轻度梗塞，CK 的数值就不一定会上升，但 CK-MB 通常还是会出现异常。虽然如此，也不能只凭 CK-MB 一个项目上升，就断言 AMI 的发生，有时严重的骨骼肌伤害也会引起 CK-MB 明显上升，应参考其他的项目或理学检查才下诊断。

　临床上使用 CK-MB 来诊断 AMI 已行之多年，也建立了良好的使用判读模式。虽然新的心肌梗塞指标不断被研发出来，至少到目前为止它还是重要的诊断参考依据。

　健保代码：09071C

　正常参考值：< 5.0 ng/mL

　检体处理：血清或 heparin 血浆 0.5 mL。采血後尽速与血球分离，避免溶血。室温下仅安定 3 小时;冷藏可保存 1 天;冷冻可保存 2 天，冷冻-解冻以一次为限。

CK-MB综述

　一，CK-MB介绍

　肌酸激酶(CK)主要存在于脊椎动物中，通常存在于动物的心脏，骨骼肌以及脑等组织的细胞质和线粒体中。CK催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之间磷酸转移的可逆反应。CK活性在人体中存在较广泛，在血中半衰期约为6-8小时。CK与ATP的再生有关，其催化作用是在生理水平上维持细胞内ATP浓度，CK催化作用是可逆的，即在pH9.0时可催化肌酸和ATP生成磷酸肌酸和ADP，为正反应;也可在pH6.7时催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，为逆反应。其中在中性条件下，逆反应是正反应的2-6倍，即以生成ATP为主，以保证组织细胞所需的能量来自ATP;而正反应有利于线粒体内氧化磷酸化生成的ATP，以磷酸肌酸的形式进入细胞液，供应细胞生理活动的需要。因此肌酸激酶是一个与细胞内能量转运，肌肉收缩，ATP的再生有直接关系的重要激酶。

　CK 是一个二聚体, 有3种同工酶的形式存在: 2个B单体(CK-BB )，2个M单体(CK-MM)，MB的单体混合体(C K-MB)。这3种同工酶分子量相同,催化相同的化学反应, 但其分子结构和来源不同:CK-BB来源于横纹肌, CK-MM来源于大脑和消化道, 而CK-MB来源于心肌。心肌中CK2MB占CK总量的15 %～25 %。所以在心肌损伤, 特别是急性心肌梗(AMI)时,测定CK-MB对AMI的诊断有极大的临床意义。

　二，CK-MB的检测方法和评价

　常规的CK-MB的测定主要采用的是免疫抑制法，它测定的是CK-MB的活力。正常血清中CK同工酶主要为CK-MM,CK-MB和极少量的CK-BB，由于CK-BB的含量极微，可忽略不计，因此此方法假设血清中只有CK-MM和CK-MB。在试剂中加入抗CK-M亚单位的多克隆抗体, 从而抑制CK-MM和CK-MB中M亚单位活性, 测得结果相当于CK-MB中B亚单位活性, 将结果乘以2即相当于CK-MB活力。此方法迅速，简介，省时，有较高的敏感性，但是影响

　因素和缺陷众多。简要讨论如下：

　1.酶易于老化：

　CK-MB活性的酶易于老化，主要表现为酶构象改变。其引起CK-MB活性检测降低或正常的原因可能是由于过了检测时间，以致血清中酶老化使酶的催化活性降低或丧失，从而导致酶的活化能升高所致。

　2.巨CK的干扰：

　巨CK是巨分子酶, 比正常情况下相应的酶有着高分子团, 不被抗CK-M抗血清所抑制, 表现为血清中?CK-MB ?占CK活力50%以上, 而CK活力正常或轻度或中度增高。巨CK大部分情况下是酶与一种免疫球蛋白的复合物, 称巨CK1, 通常免疫球蛋白是IgG 和IgA , 偶见IgM , 当形成复合物时, CK-MB试剂不但不能抑制CK-M , 而且因计算时结果乘以2, 更加扩大了误差; 而巨CK2是一种不正常低聚的线粒体CK,又称CK-Mt, CK-Mt抗原性与CK-M 不同, 抗M抗体不能抑制CK-Mt,故形成CK-MB的假阳性。

　3.CK-BB的干扰：

　免疫抑制法检测CK-MB活性的方法是假定标本中无CK-BB活性。同工酶CK-BB主要存在于脑组织中, 正常情况其在血清中活性很低, 部分脑部疾患、前列腺等组织肿瘤出现时，组织中CK-BB释放进入外周血, 由于CK-BB活性的升高, 必定影响CK-MB测定结果的准确性，造成CK-MB的假阳性。

　4.溶血的干扰：

　测定CK、CK-MB活力尽量不使用溶血标本。众所周知, 红细胞中不含CK, 但红细胞中含有腺苷酸激酶(AK) , AK能直接参与CK速率法的第二步反应, 在没有CK的情况下,A K 可直接与葡萄糖-6磷酸反应在腺苷二磷酸作用下经葡萄糖-6磷酸脱氢酶催化使NAD还原成NADH, 从而引起340nm处吸光度上升, 从上述反应可看出, 即便血清中不含CK, 溶血标

　本中的AK也能直接参与2ADP?ATP +AMP的反应, 故对CK-MB的测定结果也带来一定影响。

　基于以上的事实，推荐以CK-MB的质量法来代替活力测定。质量检测采用吖啶酯作为化学发光示踪物，利用抗CK?MB单克隆抗体标记吖啶酯，抗CK-BB单克隆抗体包被磁微粒，采用双抗体夹心磁微粒化学发光免疫测定CK?MB的浓度。实验证明：加入干扰物(CK-MM和CK-BB)前后CK-MB的质量未见明显变化。说明它不受非典型CK、巨CK和CK-BB等多因素的影响。同时，它也不受酶老化的影响，其检测灵敏度和特异性也高于CK-MB活性检测。因此，对于缺血性心肌损伤患者的临床诊断，相比之下，CK-MB质量检测比CK-MB活性检测更为合适。

　三，CK-MB的临床应用

　1.诊断AMI

　有关实验表明，在症状发生后12～48d时采样分析，CK-MB质量的临床灵敏度和临床特异性分别为96.8%和89.6%，这就使它在众多心肌标志物中脱颖而出，成为对AMI临床诊断起重要作用的一个指标。同时，结合cTnI、Myo等心肌特异标志物可提高临床诊断的准确性。

　2.不稳定型心绞痛(UA)的预后判断

　UA易发展为AMI或猝，由于传统的酶学指标和心电图对一些亚急性心肌梗及小灶性心肌梗等微小心肌损伤的患者难以检出或无特征性改变，使临床医生很难对UA患者进行前瞻性观察并采取相应的措施。临床医生可根据血清CK?MB定量检测结果来判断UA患者的预后情况，方便选择最佳的治疗方案，以期达到最佳的治疗效果。

　3.缺血性心肌损伤的危险分层

　对于缺血性心肌损伤，特别是AMI，为了能了解疾病病情的进程，可利用CK-MB质量

　升高的程度对该疾病进行危险分层，以方便临床医生利用该危险分层建立合理的治疗方案，减轻患者痛苦和经济负担。

　4.监护溶栓效果，确定再灌注

　在缺血性心脏疾病中，当被阻塞的冠脉再通时，心肌中的CK-MB被血流冲刷出来，引起血液中CK-MB质量升高，峰值时间提前。因此我们可通过CK-MB定量检测结果来判断溶栓治疗在短时间内再通与否，确定心肌再灌注以及观察治疗效果等。除此之外，CK-MB质量还可以用于较早期诊断AMI，也可以用于估计梗范围大小或再梗。

　四，心肌酶谱

　心肌酶是存在于心肌的多种酶的总称，一般有乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)，肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草转氨酶(AST)、?-羟丁酸脱氢酶(?-HBD)。

　1. ?-羟丁酸脱氢酶(?-HBD)

　?-羟丁酸脱氢酶不是一个独立的特异酶，而是含有H亚基的LD-1和LD-2的总称。测定?-羟丁酸脱氢酶，其实际反映的是乳酸脱氢酶同工酶LDH1和LDH2的活性，对诊断心肌疾病和肝病有一定意义。

　?-羟丁酸脱氢酶(?-HBD)正常值：90～220U/L;

　临床意义： (1)升高：

　1)、急性心肌梗、恶性贫血、溶血性贫血、畸胎瘤(LDH/?-HBDH比例增加)。

　2)、白血病、性淋巴瘤、传染性单核细胞增多症 (LDH/?-HBDH比例不增加)。

　(2)降低：

　免疫抑制剂、抗癌剂(LDA也降低)，遗传性变异的LDH-H亚型欠缺症

　(LDH/?-HBDH比值下降)。

　2. 血清谷丙转氨酶(ALT)

　谷丙转氨酶，主要存在于各种细胞中，尤以肝细胞为最，整个肝脏内转氨酶含量约为血中含量的100倍，在各种病毒性肝炎的急性期，药物中毒性肝细胞坏时，ALT大量释放入血中。因此它是诊断病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指标。

　血清谷丙转氨酶(ALT)正常参考值：男性：5～40 U/L;女性：5～35 U/L。

　临床意义

　(1)血清ALT活性增高：

　① 肝胆疾病：传染性肝炎、肝癌、中毒性肝炎、脂肪肝和胆管炎等。

　② 心血管系统疾病：心肌梗、心肌炎、心力衰竭时肝淤血和脑出血等。

　③ 药物和毒物：氯丙嗪、异菸肼、奎宁、水扬酸制剂及乙醇、铅、汞、四氯化碳或有同磷等引起ALT活性增高。

　(2)ALT活性降低：磷酸吡哆醛缺乏症。

　3. 谷草转氨酶(AST)

　谷草转氨酶又名天门冬氨酸氨基转移酶，在心肌细胞中含量最高，所以当心肌细胞受到损伤时，大量的酶释放人血，使血清含量增加，临床一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查，但肝脏损害时其血清浓度也可升高，当谷丙转氨酶(ALT)明显升高，谷丙/谷草比值>1时，就提示有肝实质的损害。

　谷草转氨酶(AST)正常参考值：8～40 U/L。

　临床意义

　病理性升高：

　(1)心肌梗塞发病6～12小时显著升高，增高的程度可反映损害的程度，并在发作后48小时达到最高值，约3～5天恢复正常;

　(2)各种肝病AST可增高，肝病早期和慢性肝炎增高不明显，AST/ALT比值小于1。严重肝病和肝病后期增高，AST/ALT比值大于1;

　(3)其他疾病如心肌炎、肾炎及肺炎等AST也轻度升高。

　4. 乳酸脱氢酶(LDH)

　人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)几乎存在于所有组织中，用电泳法可以分离出5种同工酶区带，根据其电泳迁移率的快慢，依次命名为LDH1，LDH2，LDH3，LDH4，LDH5。不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同，存在明显的组织特异性，人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多，骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。这些组织中的LDH的活力比血清中高得多。所以当少量组织坏时，该酶即释放血而使其他血液中的活力升高。

　乳酸脱氢酶(LDH)正常参考值：100～240 U/L。

　临床意义：

　① 心肌梗塞：心肌梗塞后9～20h开始上升，36～60h达到高峰，持续6～10天恢复正常(比AST、CK持续时间长)，因此可作为急性心肌梗塞后期的辅助诊断指标。

　② 肝脏疾病：急性肝炎，慢性活动性肝炎，肝癌，肝硬化，阻塞性黄疸等。肿瘤转移所致的胸腹水中LDH往往也升高。

　③ 血液病：如白血病、贫血、恶性淋巴瘤等，LDH升高。

　④ 骨骼肌损伤、进行性肌萎缩、肺梗塞等。

　⑤ 恶性肿瘤转移所致胸、腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。

　⑥ 正常新生儿LDH水平很高，可达775～2000U/L，满月后为180～430 U/L，以后随年龄增长逐渐降低，12岁后趋于恒定。

　由于测定LD的特异性较差，目前临床上多同时测定乳酸脱氢酶同工酶来判断其组织

　来源，用于心肌梗塞、肿瘤、肝病等的诊断。具体诊断如下：

　(1)心肌细胞LD活性远高于血清数百倍，尤以LDH1和LDH2含量最高。急性心肌梗塞时，血清LDH1和LDH2显著升高，约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大于1，且LDH1升高早于LDH总活性升高。病毒性和风湿性心肌炎及克山病心肌损害等，病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1还见于溶血性贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等。

　(2)脑干含LDH1较高。颇脑损伤仅累及大脑半球时，只有血清同工酶谱的绝对值增高，而不影响同工酶的相互比值，如果累及脑干时，病人血清LDH1的含量也增高。

　(3)胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升高。

　(4)肝细胞损伤或坏后，向血流释入大量的LDH4和LDH5，致使血中LDH5/LDH4比值升高，故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标。急性肝炎以LDH5明显升高，LDH4不增，LDH5/LDH4>1为特征;若血清LDH5持续升高或下降后再度升高，则可认为是慢性肝炎;肝昏迷病人的血清LDH5、LDH4活性极高时，常示预后不良;原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为常见。

　(5)肾皮质以LDH1和LDH2含量较高，肾髓质以LDH4和LDH5活性较强。患急性肾小管坏、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时，血清LDH5均可增高。

　(6)肺含LDH3较多，肺部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时LDH3和LDH4相等，LDH1明显下降;肺脓肿病人的血清LDH3、LDH4常与LDH5同时升高。

　(5)肌营养不良病人肌肉中LDH1、LDH2明显增高，LDH5显著下降;而血清则相反，LDH1、LDH2明显减少，LDH4、LDH5显著，表明血清LDH同工酶主要来自肌肉组织。煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1、LDH2下降，LDH4、LDH5升高。

吖啶酯怎么读

2017年检验技师考试免疫学考点总结

　免疫学检验是检验技师考试的考点之一。为了方便考生更好的复习关于免疫学检验的知识。下面是我为大家带来的关于免疫学检验的知识，欢迎阅读。

　0、免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应。

　1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能

　2、免疫防御(对外);免疫自稳(防自身免疫病);免疫监视(防肿瘤)。

　3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺;外周免疫器官：淋巴结、脾脏(最大)、黏膜相关淋巴组织

　4、B细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫;B细胞受体=BCR=mIg

　表面标志：膜免疫球蛋白(SmIg)、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体。

　成熟B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22 (成熟B细胞的mIg主要为mIgM和mIgD)同时检测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。

　B细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验(体液免疫功能)。

　5、T细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3(多链糖蛋白);辅助T细胞的标志是CD4;杀伤T细胞的标志是CD8;T细胞受体=TCR。

　T细胞和NK细胞的共同表面标志是CD2(绵羊红细胞受体);

　CD3+CD4+CD8- = 辅助性T细胞(Th)

　CD3+CD4-CD8+ = 细胞毒性T细胞(Tc或CTL)(T细胞介导的细胞毒试验)

　CD4+CD25+ = 调节性T细胞(Tr或Treg)

　T细胞功能检测：植物血凝素(PHA)刀豆素(CONA)刺激T细胞增殖。增殖试验有：形态法、核素法。

　T细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法

　*E花环试验是通过检测SRBC受体而对T细胞进行计数的一种试验;

　6、NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞(肿瘤细胞和病毒感染的细胞)

　表面标志：CD16(ADCC)、CD56。

　测定人NK细胞活性的靶细胞多用K562细胞株，而测定小鼠NK细胞活性则常采用YAC-1细胞株。

　7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统(MPS，表面标志CD14，包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞)和中性粒细胞。(表达MHCⅡ类分子)

　8、人成熟树突状细胞(DC)(专职抗原呈递功能)：表面标志为CD1a、CD11c和CD83。

　9、免疫球蛋白可分为分泌型(sIg，主要存在于体液中，具有抗体功能)及膜型(mIg，作为抗原受体表达于B细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白)

　10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG>IgA>IgM>IgD>IgE五类(按重链恒定区抗原性(CH)排序)

　免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。

　11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区(CH、CL)

　12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和VL(高变区)是抗原结合部位。

　13、IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白(IgG1最高)，血液和细胞外液中的主要抗体。也是再次免疫应答的主要抗体，是唯一能通过胎盘的抗体，大多数抗菌抗体、抗病毒抗体是IgG，某些自身抗体及超敏Ⅱ型抗体是IgG，免疫学检测中第二抗体也以IgG为主。

　14、IgA：分血清型(单体存在)及分泌型;分泌型IgA(sIgA)为二聚体，性能稳定，主要存在于胃肠道、支气管分泌液、初乳、唾液、泪液中，局部浓度高，是参与黏膜局部免疫的主要抗体。

　15、IgM：为五聚体，主要存在于血液中，是Ig中分子量最大的(又称巨球蛋白)。个体发育最早合成和分泌的抗体。抗原刺激后体液免疫应答中最先产生的抗体，感染过程中血清IgM水平升高，说明近期感染。新生儿脐血中若IgM增高，提示有宫内感染。

　16、IgE：为单体结构，正常人血清中含量最低。IgE为亲细胞抗体，介导Ⅰ型超敏反应。特异性过敏反应和寄生虫早期感染患者血清中可升高。

　17、补体：具有酶样活性的球蛋白(肝细胞、巨噬细胞产生);激活途径主要有三种：经典途径(以结合抗原后的IgG或IgM类抗体为主要激活剂(双链DNA)，C1～C9全部参与)、替代途径(病原微生物细胞壁成分(脂多糖)直接激活补体C3，然后完成C5～C9的激活过程)、MBL途径(由急性炎症期产生的甘露糖结合凝集素(MBL)与病原体结合后启动激活)。

　18、补体系统中C3含量最多，C2含量最少。

　19、灭活：加热56℃30分钟，补体丧失活性

　20、补体清除免疫复合物的方式：吞噬调理;免疫粘附;免疫复合物抑制。

　21、完全抗原=反应原性+免疫原性。半抗原=反应原性(无免疫原性)

　22、抗原抗体结合力(分子间引力)：静电吸引、范德华力、氢键、疏水作用力(最强)

　23、抗原抗体反应的四大特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性;受反应条件(如温度、pH、电解质、抗原抗体比例等)的影响。

　24、抗体过量?前带;抗原过量?后带(钩状效应)

　25、抗原抗体反应可分为两个阶段：第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应;第二阶段为可见反应阶段，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。

　26、颗粒性抗原出现凝集反应。可溶性抗原出现沉淀反应。单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。

　27、木瓜酶水解IgG为2Fab+Fc;胃蛋白酶水解IgG为F(ab)2+nFc。

　28、最常用于免疫动物的佐剂是弗氏佐剂，弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂(弗氏不完全佐剂加卡介苗)和弗氏不完全佐剂两种。

　29、R(兔子)型抗血清是用家兔及其他动物免疫产生的抗体，抗原抗体反应比例合适范围较宽，适于作诊断试剂。

　H(马)型抗血清是用马等大动物免疫获得的抗体，抗原抗体反应比例合适范围较窄，一般用作免疫治疗。

　30、抗血清常见保存条件：2-8℃保存;冷冻保存(最常用);真空干燥保存(5-10年)。

　31、杂交瘤细胞放入液氮(-196℃)前，需要逐步降温。复苏细胞时，从液氮罐内取出冻存管，立即浸入37℃水浴。

　32、凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合;②出现可见的颗粒凝聚。

　33、直接凝集反应的原理是细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质(0.85%氯化钠)参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。抗原=凝集原，抗体=凝集素。

　34、玻片凝集试验：主要用于抗原的定性分析，AB0血型的测定。

　试管凝集试验：肥达氏试验、外斐试验、输血交叉配血试验;

　35、红细胞包被抗原，用以检测抗体的血凝反应，称为正向间接血凝反应(PHA)。

　红细胞包被抗体，用以检测抗原的血凝反应，称为反向间接血凝反应(RPHA)。

　36、间接血凝抑制试验：可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原。

　37、金**葡萄球菌A蛋白(SPA)

　38、血凝试验可在微量滴定板或试管中进行，将标本倍比稀释，一般为1:64，同时设不含标本的稀释液为对照孔。凡红细胞沉积于孔底，集中呈一圆点的为不凝集。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。

　39、明胶凝集试验(间接)：HIV-1抗体和抗精子抗体检测

　40、抗球蛋白试验，又称Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种很有用的方法。包括直接Coombs试验(检测红细胞上的不完全抗体)和间接Coombs试验(游离在血清中的不完全抗体)

　41、沉淀反应分两个阶段：第一阶段为抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小的复合物，肉眼不可见。第二阶段为形成可见的免疫复合物，约需几十分钟到数小时才能完成，如沉淀线、沉淀环。

　42、免疫比浊：最适pH为6.5～8.5，磷酸盐缓冲液。

　43、对流免疫电泳：抗体流向负极，抗原流向正极

　44、免疫固定电泳也用予尿液中本-周蛋白的检测及?、?分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检测及分型。

　45、RIA(放免)核素(125Ⅰ)标记抗原，竞争抑制(标记抗原和非标记抗原竞争限量抗体);IRMA(免疫放射)核素标记抗体，非竞争结合(过量标记抗体，反应速率比RIA快，灵敏度明显高于RIA。)

　RIA可以测定大分子和小分子抗原，但IRMA则只能测定至少有两个抗原决定簇的抗原。

　46、常用的荧光素有：异硫氰酸(FITC)黄绿色，最常用;四乙基罗丹明(RB200)橘红色;四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)橙红色;藻红蛋白(R-RE)橙色。其他：铕(Eu3+)

　47、荧光标记蛋白的常用方法：搅拌法和透析法。

　荧光抗体效价鉴定：抗原含量为1g/L时，抗体效价>1：16

　48、时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)以镧系元素(如：铕)化合物为荧光标记物。

　49、偏振免疫测定的偏振波长是485nm(蓝光)。

　50、辣根过氧化物酶(HRP)：底物(1)邻苯二胺(OPD)，(2)四甲基联苯胺(TMB) ELISA中应用最广泛的底物。

　碱性磷酸酶(ALP)：底物：对-硝基苯磷酸脂(p-NPP)

　?-半乳糖苷酶(?-Gal)：底物：4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)

　51、异相法：先分离，后测定;均相法：不分离，直接测。

　52、酶联免疫吸附试验(ELISA)：

　必要的试剂：①固相的抗原或抗体;②酶标记的抗原或抗体;③酶反应的底物。

　抗原测定：蛋白大分子抗原用得最多的是双抗体夹心法(HBsAg)。只有单个抗原决定簇的小分子，则使用竞争抑制法。

　抗体测定：通常使用间接法(HCV、HIV)、双抗原夹心法(HBsAb)、竞争法(HBcAb、HBeAb)和捕获法(IgM)等

　*待测孔最后显示的颜色深浅与标本中的待测抗原或抗体呈正相关的是：双抗体夹心法、双位点一步法、间接法测抗体;

　53、化学发光底物有：直接化学发光剂：吖啶酯和三联吡啶钌;酶促反应发光剂：(标记酶HRP)鲁米诺及其衍生物、(标记酶为碱性磷酸酶)AMPPD;

　54、免疫印迹实验中常选用多克隆抗体。

　55、外周血单个核细胞的分离的分层液常用：Ficoll(由上到下为血浆，单个核细胞，粒，红)和Percoll(由上至下：细胞，单个核细胞，淋，红，粒)。

　56、纯淋巴细胞群的采集有：黏附贴壁法，吸附柱过滤法，磁铁吸引法，Percoll分离液法。

　57、T细胞和B细胞的分离：E花环沉降法，尼龙毛柱分离法

　58、淋巴细胞活力测定：台盼蓝染色法，细胞为蓝色。

　59、CD4是HIV受体，HIV感染时CD4/CD8比值明显降低。

　60、CD4/CD8升高常见于自身免疫性疾病;而CD4/CD8降低常见于病毒感染、恶性肿瘤和再生障碍性贫血等。

　61、(ELISA)双抗体夹心法是用于细胞因子测定的最常用方法。

　62、流式细胞仪：前向散射光(FS)反映颗粒的大小。侧向散射光(SS)反映颗粒内部结构复杂程度、表面的光滑程度。荧光(FL)反映颗粒被染上荧光部分数量的多少。

　63、免疫荧光标记最常用的荧光染料：异硫氰酸荧光素(FITC)亮绿色荧光。德州红红色荧光。藻胆蛋白类橙色至红色荧光。

　64、临床上常用三色荧光抗体标记将CD3-CD16+CD56+淋巴细胞确定为NK细胞。

　65、AIDS患者的一个特征性免疫诊断指标表现为：T淋巴细胞总数减少，T细胞亚群CD4Th/CD8Tc比例倒置，Th/Tc<1.0，Th细胞数量显著下降甚至测不出，而Tc细胞数量可正常或增加，NK细胞减少或活力下降，B淋巴细胞群则处于正常范围。

　65、强直性脊柱炎?HLA-B27

　66、SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以IgM增高为主。

　67、M蛋白(MP)是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖(>30g/L)所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白。多无免疫活性，故又称副蛋白。临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等

　68、M蛋白-最基本方法：血清蛋白区带电泳技术

　M蛋白-粗筛试验：血清免疫球蛋白定量(单向琼脂免疫扩散法和免疫比浊法)

　M蛋白-鉴定，首选方法：免疫固定电泳(IFE)技术(区带电泳技术与特异性抗血清的免疫沉淀反应相结合)是临床最常用的方法。

　69、IgD降低见于原发性无丙种球蛋白血症、矽肺

　70、CSF中的浓度：IgG>IgA>IgM。神经系统肿瘤时，以IgA和IgM升高为主。

　(感染、血管病变、系统性疾病=IgG升高)

　71、本-周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链。尿中可测得，血中呈阴性(原因是本-周蛋白分子量小，极易迅速自肾脏排出，血中含量并不升高)

　72、冷球蛋白又称冷免疫球蛋白，在-4℃时发生沉淀，于37℃时又复溶解。采血是冷球蛋白检测的关键，宜在体温条件下采集和保存静脉血。

　73、补体结合试验(CFT)，梅毒的诊断，华氏反应。

　74、非均相荧光免疫测定：时间分辨荧光免疫测定法。

　均相荧光免疫测定：荧光偏振免疫测定法。

　75、链球菌感染：ASO(胶乳凝集试验、免疫散射比浊法)

　76、伤寒沙门菌有菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原。肥达反应，效价?1:80为阳性

　77、卡氏肺孢菌，又称卡氏肺孢子虫，为类真菌。

　78、Ⅰ型超敏反应：由特异性IgE抗体介导产生，其发生速度最快。(青霉素、支气管哮喘)

　提高Th1细胞活性，减少IL-4的分泌，可降低IgE的产生，阻断IgE介导的Ⅰ型超敏反应。

　参与Ⅰ型超敏反应：肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞。

　79、Ⅱ型超敏反应：又称细胞毒型或细胞溶解型超敏反应，它是由靶细胞表面的抗原与相应IgG或IgM类抗体结合后，在补体(细胞溶解)、巨噬细胞(吞噬)和NK细胞(ADCC作用)参与下，引起的以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反应。(输血反应、新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血、药物过敏性血细胞减少症、肺出血肾炎综合征、甲状腺功能亢进)

　80、Ⅲ型超敏反应：由可溶性免疫复合物沉积于局部或全身多处毛细血管基底膜，通过激活补体，并在血小板、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞等的参与下，引起的以充血水肿、局部坏和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反应和组织损伤。(Arthus反应、类Arthus反应、血清病、链球菌感染后肾小球肾炎、类风湿关节炎、SLE)/81、Ⅳ型超敏反应：又称迟发型超敏反应(DTH)，是效应T细胞与特异性抗原结合后，引起的以单个核细胞浸润和组织损伤为主要特征的炎症反应。(细胞免疫)效应性CD4+Th1细胞识别抗原后活化，可释放IFN-?、TNF、淋巴毒素(LT)、IL-3、GM-CSF、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)等多种细胞因子。

　常见Ⅳ型超敏反应性疾病：感染性迟发型超敏反应(结核分枝杆菌、病毒、原虫)、接触性皮炎、移植排斥反应。(结核菌素皮试、斑贴试验)

　82、变性的IgG可刺激机体产生抗变性IgG抗体(类风湿因子)

　83、ITP患者血清中存在有抗血小板抗体，该抗体可以缩短血小板的寿命。

　84、抗乙酰胆碱受体抗体：对重症肌无力(MG)具有诊断意义。

　85、毒性弥漫性甲状腺肿患者血清中有抗促甲状腺激素受体(TSHR)的IgG型自身抗体。(甲状腺功能的'亢进)

　86、多发性肌炎是以损害肌肉为主要表现的自身免疫性疾病，如果同时有皮肤损害，则称为皮肌炎。

　87、75%的PSS患者有抗核抗体阳性，抗Scl-70抗体是PSS的特异性抗体，80%～95%的局限性硬皮病患者抗着丝点抗体阳性。

　88、自身免疫病(AID)的特征：高滴度自身抗体，病理特点为免疫炎症损伤与抗原分布一致，能建动物模型。

　89、抗DNP抗体(抗核蛋白抗体)通常完全被DNA和组蛋白吸收，是形成狼疮细胞的因子。

　90、ANA阳性的荧光现象分：核膜型、均质型、斑点型、核仁型。ANA常为自身免疫病的初筛试验。

　91、ENA是可提取核抗原的总称，分子中不含DNA。

　92、抗dsDNA抗体对SLE有较高的特异性。抗Sm抗体也是SLE的特异性标志之一。此两项常为SLE确诊指标。(对疑为SLE的患者，应先进行ANA和抗dsDNA抗体的检测，当ANA和(或)抗dsDNA抗体阳性时，再作抗ENA抗体谱的检测。如有抗Sm抗体和(或)抗RNP抗体阳性，可实验室诊断为SLE)

　93、抗核RNP抗体：为MCTD(混合性结缔组织病)的诊断指标。

　94、抗SSA/抗SSB抗体：为干燥综合征(SS)的诊断指标。(当ANA阳性而抗dsDNA抗体阴性，抗ENA抗体谱中抗SsA抗体和(或)抗ssB抗体阳性，可实验室诊断为干燥综合征。)

　95、抗Jo-1抗体：多发性肌炎(PM)患者常为阳性。

　96、抗Scl-70抗体：进行性系统性硬皮症(PSS)的诊断指标。

　97、NCA：原发性小血管炎的特异性血清标志物

　98、内风湿性关节炎(RA)：自身抗体有RF、抗角蛋白抗体(AKA)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)。

　99、Farr法测定dsDNA抗体的特异性高，为公认标准法，当抗dsDNA抗体结合率大于20%时对SLE有意义。

　100、抗线粒体抗体(AMA)：原发性胆汁性肝硬化

　101、巨球蛋白血症：以分泌IgM的浆细胞恶性增殖为病理基础的疾病。好发于老年男性，主要表现骨髓外浸润，以肝、脾和淋巴结肿大为主要体征并伴有血黏滞过高综合征，如表现为视网膜出血。(血清呈胶冻状难以分离，电泳时血清有时难以泳动，集中于原点是该病的电泳特征)

　102、异常免疫球蛋白检测的应用原则

　初筛实验：区带电泳分析、免疫球蛋白定量检测和尿本-周蛋白定性检测。

　确证实验：免疫电泳、免疫固定电泳、免疫球蛋白亚型、血清及尿中轻链蛋白的定量检测。

　103、HIV诱导的免疫应答

　1.体液免疫应答HIV感染后，机体可产生：中和抗体、抗P24壳蛋白抗体、抗gp120和抗gp41抗体

　2.细胞免疫应答：CD8+T细胞应答、CD4+T细胞应答。

　104、HIV抗原检测：核心抗原p24(ELISA)

　105、免疫印迹法判断标准为：①HIV抗体阳性：至少有两条膜带(gp41/gp120/gp160)或至少一条膜带与p24带同时出现;②HIV抗体阴性：无HIV抗体特异性条带出现;③HIV抗体可疑：出现HIV特异性条带，但带型不足以确认阳性者。

　CD4+T细胞计数是反映HIV感染患者免疫系统损害状态的最明确指标。当CD4+T细胞低于500/?l，则易机会性感染;低于200/?l，则发生AIDS。

　106、CEA大于60?g/L时可见于结肠、胃、肺癌。手术6周后CEA水平正常。

　107、AFP?原发性肝癌。PSA?前列腺癌

　108、糖类抗原有：CA125：上皮性卵巢癌和子宫内膜癌;CA15-3：乳腺癌;CA19-9：胰腺癌、结直肠癌。

　109、神经母细胞瘤和小细胞肺癌(基因有P53，RB)的标志物：神经元特异性烯醇化酶(NSE)

　110、排斥反应有：宿主抗移植反应(HVGR)和移植物抗宿主反应(GVHR)。

　111、移植物存活与HLA配型的关系是：①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多，移植物存活几率越高;②供、受者HLA-DR位点相配更重要，因为HLA-DR和HLA-DQ基因有很强的连锁不平衡，DR位点相配的个体，通常DQ位点也相配;③不同地区HLA匹配程度与移植结果的关系有着不同的预测价值。

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吖啶酯：ā dìng。

如果吖啶环上的取代基能与吖啶环上的C-9 和H2O2形成不稳定的二氧乙烷（此二氧乙烷可迅速分解为CO2 和电子激发态的N - 甲基吖啶酮，当回到基态时发出光子），则这类取代吖啶化合物可做为化学发光标记物。

根据取代基的不同，常用作化学发光标记物的吖啶取代物分为两类：吖啶酯和吖啶磺酰胺。它们的结构中都有共同的吖啶环。

它们的发光机理相同：在碱性H2O2 溶液中，分子受到过氧化氢离子进攻时，生成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2 和电子激发态的N - 甲基吖啶酮，当其回到基态时发出最大发射波长为430nm 的光子。

吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物应用于化学发光免疫分析，通常采用的体系是Acridinium ester/ H2O2 系统。

即用吖啶酯或吖啶磺酰胺标记抗体或抗原，用HNO3+ H2O2 和NaOH 作发光启动试剂。有些在发光启动试剂中加入Triton X - 100 , CTAC , Tween - 20 等表面活性剂以增强发光。