吖啶啥意思-吖啶盐标记

2024-10-13 07:40:52

吖啶啥意思-吖啶盐标记

细胞自噬预实验

化学染色法

1、试验目的

通过化学染料吖啶橙（acridine orange，AO）染色木犀草素处理后的HepG2细胞判断木犀草素是否诱导HepG2细胞发生自噬。

2、试验原理

3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl2, 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔**或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。AO也可以渗透进入酸性细胞器，例如自噬溶酶体，发生自噬的细胞经吖啶橙染色，在荧光显微镜下可观察到红**点状体，称为酸性小体，当PH值较低的时候，AO发出红色荧光，且强度与酸性程度相关。所以在AO标记的细胞中，酸性囊泡细胞器结构可以通过荧光显微镜下观察到。

ivd体外诊断试剂原料具体有哪些？

吖啶酯是一种光敏染料，可以与大分子如蛋白质等进行共价结合形成标记物，用于生物化学和细胞生物学研究中。然而，吖啶酯标记大分子和小分子都可能面临一些困难。

对于大分子，如蛋白质等，吖啶酯可能难以与其进行有效的共价结合，因为大分子的复杂性、多样性和大小形状等方面的限制。对于小分子，吖啶酯可能难以在复杂生物化学环境中对其进行准确的标记，因为小分子的反应活性较高，且其分子结构可能影响吖啶酯的结合。

另外，建议用G25脱盐柱分离吖啶酯标记的大分子化合物，而吖啶酯标记的小分子化合物则建议用柱层析分离。

因此，可以说，吖啶酯标记大分子和小分子都可能存在困难，具体困难程度取决于具体的实验条件和目标。在进行实验时，需要综合考虑各种因素，选择最合适的方法进行标记。

发光底物吖啶酯和鲁米诺相比较而言哪个更好？

采血管试剂：血清分离胶、采血管试剂：血清分离胶、肝素钠、肝素锂、EDTA二钾、EDTA三钾、促凝剂、硅化剂、柠檬酸钠、草酸钾

诊断试剂原材料：TOOS、TOPS、ADOS、ADPS、ALPS、DAOS、HDAOS、MADB、MAOS等。产品白色晶体、纯度高（大于99%）、溶解性好，有别于市场上淡蓝色或棕色产品。

缓冲剂：Tris、Bicine、Caps、Mops、Taps、EPPS、HEPES、PEP、PIPES、MOPSO。产品白色晶体，纯度＞99%，吸光度＜0.05。肝素钠、肝素锂、EDTA二钾、EDTA三钾、促凝剂、硅化剂、柠檬酸钠、草酸钾。发光剂：鲁米诺吖啶酯吖啶盐德晟生化。

化学发光酶免疫测定中常用来标记抗原或抗体的物质为（　　）。

吖啶酯和鲁米诺都是发光底物，但在某些方面存在差异。以下是它们之间的比较：

化学发光量子产率：吖啶酯的化学发光量子产率比鲁米诺高，这意味着使用相同量的发光剂时，吖啶酯产生的光子数更多，发光信号更强烈。

标记条件温和性：吖啶酯标记条件温和，对标记物没有明显负面影响。而鲁米诺在某些情况下可能会影响标记物的稳定性。

价格：吖啶酯的价格通常比鲁米诺高一些，这可能是因为它的制备成本相对较高。

使用范围：鲁米诺在某些检测体系中可能会产生较强的本底噪声，影响检测的灵敏度。而吖啶酯在这方面表现得更好，更适合用于一些灵敏度要求较高的检测体系。

综上所述，在某些情况下，吖啶酯可能比鲁米诺更适合作为发光底物。然而，这并不意味着鲁米诺不好。不同的发光底物适用于不同的检测体系，选择哪种发光底物需要根据具体的实验需求进行选择。武汉德晟生化建议根据不同的实验需要选购不同的发光剂。

化学发光剂有哪些？

答案：B

A项，吖啶酯类是目前常用的直接标记发光剂。BD两项，目前化学发光酶免疫测定中常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）。辣根过氧化物酶催化的发光剂为鲁米诺及其衍生物；碱性磷酸酶催化的发光底物为AMPPD。C项，三联吡啶钌是电化学发光剂。E项，4-MUP（4-甲基伞酮磷酸盐）是碱性磷酸酶反应的荧光底物。化学发光酶免疫测定中常用来标记抗原或抗体的物质是鲁米诺。

萤火虫荧光素酶（Luciferase）标记肿瘤细胞活体成像技术的方法介绍

发光剂是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，根据上述发光特点可将发光剂分为荧光素、生物发光剂和化学发光剂三种。常用的化学发光剂有以三种，酶促反应的发光底物的发光剂，直接化学发光剂，电化学发光剂。

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，许多大中型城市，乳腺癌已居女性恶性肿瘤亡率的首位。乳腺癌复发转移是导致乳腺癌患者亡的最主要原因，淋巴结阴性的患者中约有24%～30%出现复发转移，淋巴结阳性的患者中复发转移率高达50%～60%，而转移性乳腺癌的5年生存率仅为26%。

萤火虫荧光素酶（Luciferase）是一种常用的信号分子，可以用来标记肿瘤细胞.

一．细胞方法

将带有荧光素luc转酶报告基因的真核表达重组质粒pRc/CMV2-7，利用G418筛选，获得稳染人乳腺癌细胞株MCF-7-luc，并在稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆MCF-7体外评价其发光能力。通过建立裸鼠移植瘤模型，利用活体生物发光成像系统检测肿瘤生长及转移情况，为下一步监测裸鼠移植瘤对药物作用的变化情从而为分析药物对肿瘤的治疗效果提供理想的状况.

G418筛选浓度的确定：

37℃细胞培养箱中常培养,G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml设置6个浓度梯度。在细胞接种24h后，加入6孔板中，每个浓度设2个孔在10～14d内全部亡。每天观察细胞生长情况，亡最低的G418浓度，即为筛选质粒转染克隆MCF－7细胞的浓度。

1)细胞转染

取对数生长期的MCF－7细胞，将细胞接种于6孔板内待细胞融合度达到80%～90%孔培养板中，TM即可转染。按照Lipofectamine2000试剂盒操作指南进行转染。在250μl无血清、无双抗的DMEM培培养基中加入luc质粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl无血清、无双抗的DMEM培养基中加入10μlLipofectamineTM2000，室温培育5min。将上述2种稀释液混匀，室温培育30min后加入细胞孔板中，置于培养箱常规培养。

转染24h后胰酶消化细胞并按1∶6比例接种到新6孔板中，同时加入实验确定的浓度G418，随后每2d更换一次培养基并维持G418筛选直至单细胞抗性克隆的出现。分别挑选单一抗性克隆至96孔板，待其逐渐增殖后转入24孔板中继续传代培养。

3)荧光素酶活性鉴定阳性克隆

单一抗性克隆传代至第五代时用LuciferaseAs-sayAystem检测荧光素酶活性。检测时，各克隆按1×105个/孔接种到24孔板，24h后细胞裂解液裂解12000rpm，4℃离心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl荧光素酶96microplateluminometer连续读底物，停留2s后，取10s的荧光值（RLU），每个克隆设3个复孔，保留RLU值高的细胞克隆继续传代培养，再过5代后进行荧光素酶活性检测。保留RLU值维持较高的克隆直至第30代，荧光素酶活性最高的几个克隆MCF-7-luc即为阳性克隆.

各不同数量细胞克隆的荧光值检测7-luc阳性克隆细胞按细胞数将筛出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分别接种到96孔黑板中，另外一组仅有细胞，一组仅有培养基作对照，设置2个复孔，常规培去上清并用PBS洗两次，每孔加入100μl养24h后，Luciferin使其终浓度为150μg/ml，PBS，再加入D-立即用活体成像系统检测，分析发光强度与细胞数之间的相关性。

4)细胞生长曲线绘制

MCF7-luc细胞和作为对照取表达荧光素酶的MCF-7细胞，接种于24孔板，接种密度为2×104/孔。细胞接种后1～7d，每天胰蛋白酶消化其中3孔细胞，用细胞计数仪测定细胞数。以细胞生长天数为横坐标，细胞数目为纵坐标，分别绘制两种细胞生长曲线。

二．动物模型

BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠，4～5周龄，体重（15±2）g，雌雄各3只。取对数生长期的MCF-7用PBS重悬为2．5×10/ml悬液，每只裸鼠左右背侧近腋部皮下接种100μl，共接种6只。接种后第5d采用德国BERTHOLD公司的活体成像系统检测信号强度。以后每5d观测一连续观测30d。观测前每只裸鼠戊巴比妥钠麻醉（计量为：35mg/kg体重），按150mg/kg体重的量腹腔注射luciferin（invivograde），10min后，进行活体成像观察皮下肿瘤的生长情况，定量分析各时间点的荧光值。绘制肿瘤皮下生长曲线.

MCF-7-luc细胞裸鼠皮下移植瘤的病理形态学观察

MCF-7-luc细胞裸鼠皮下接种后25d，脱颈处小鼠，取肿瘤组织，制成石蜡切片，切片厚度为3μm，经HE染色后观察细胞的病理形态学。

活体动物成像技术是近期发展起来的一种新型稳定可靠,是检测动物体内分子及细胞事件的影像检测技术，强有力手段。利用生物发光成像（BLI）可以对活体病灶的大小进行无损伤直观准确检测。

我们有自己的独立有机合成实验室，可以生产合成各种化学发光试剂，我们可以提供化学发光试剂、化学发光底物、发光标记物、发光增强剂、染料探针类、微生物和酶的显色底物以及体外诊断试剂。