原料药生产分为哪几个阶段-原料药生产rsd作用

药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。在原料药合成工艺中，选择适当的溶剂可提高产量或决定药物的性质，如晶型、纯度、溶解速率等。因此有机溶剂在药物合成反应中是必不可少和非常关键的物质。下图为阿莫西林合成路线，使用了三乙胺((C2H5)3N)。

阿莫西林合成路线图

当药品所含的残留溶剂水平高于安全值时，就会对人体或环境产生危害，应尽可能除去所有残留溶剂，以符合制剂质量标准、生产质量管理规范(GMP)或其他质量要求。

《中国药典》2020年版《0861残留溶剂测定法》通则主要根据ICH《IMPURITIES: GUIDELINE FOR RESIDUAL SOLVENTS Q3C(R7)》制定，药品中残留溶剂根据安全性主要分为4类，共涉及70种溶剂。

01检测项目及限量值增修订变化

● 异丙基苯从第三类溶剂(限度0.5%)修改为第二类溶剂(限度为0.007%)

● 甲基异丁基酮从第三类溶剂(限度0.5%)修改为第二类溶剂(限度为0.45%)

● 增加三乙胺(齐多夫定、拉米夫定等需要检测)为第三类溶剂，限度为0.5%

● “四氢噻吩”修改为“环丁砜”，限度仍为0.016%

02 ICH Q3C(R8)征求稿

2020年4月29日国家药品监督管理局药品审评中心(CDE)在官网上发布了“关于公开征求ICH《Q3C(R8)：杂质：残留溶剂的指导原则》指导原则草案意见的通知”。本次征求稿增加了3种溶剂限量要求，具体变化如下：

03产品标准执行变化

2020版药典二部化药共有249个品种标准在检查部分收载“残留溶剂”项目，相比2015版药典，42个品种新增订残留溶剂项目。经统计汇总，2020版药典化药二部234个品种标准残留溶剂项目说明了具体的检测方法(需要检测溶剂种类、对照、供试品溶液制备、色谱条件、系统适用性要求)，“二甲磺酸阿米三星”、“乌苯美司”、“双环醇”等15个品种标准残留溶剂并没有说明具体检测方法，仅提到引用0861通则，其中12个是2020版药典新增品种。

01分析仪器及附件

02常用色谱柱选型方案

01 GC结合HS-20顶空进样器测定药品中18种溶剂残留

18种溶剂标准溶液色谱图

使用纯水配制溶剂残留混合标准系列溶液，每1mL含各种溶剂浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0?g，制作标准曲线，线性良好。根据0.1μg/mL标准溶液数据，计算方法检出限(3倍噪声计算)。各组分检出限见下表，检出限均达到通则限度1/30以下，且峰面积重现性良好(顶空进样精密度RSD应达到10.0%以内)。

将溶剂残留混标溶液添加到市售小儿氨酚烷胺颗粒中，按照样品前处理方法制备，样品中加标浓度分别为0.5 μg，样品加标回收率为87.89 ~117.46%。

02 GCMS结合HS-20顶空进样器测定药品中19种溶剂残留

19种溶剂混标溶液总离子流色谱图

使用纯水配制溶剂残留混合标准系列溶液，每1mL含各种溶剂浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0?g，制作标准曲线，线性良好。根据0.1μg/mL标准溶液数据，计算方法检出限(3倍噪声计算)。各组分检出限均远低于通则限度1/1000以下，且峰面积重现性良好(顶空进样精密度RSD应达到10.0%以内)。

将溶剂残留混标溶液添加到市售小儿氨酚烷胺颗粒中，按照样品前处理方法制备，样品中加标浓度分别为0.5 μg，样品加标回收率为75 ~102%。

03 顶空-GC 法测定ICH Q3C(R8)征求稿中3种溶剂残留

3 种溶剂残留混标溶液的色谱图(1.0 ?g)

使用去离子水配制溶剂残留混合标准系列，每1mL含各种溶剂浓度分别为 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 ?g 的混标系列溶液。根据 0.1 ?g 标液数据，以 3 倍信噪比(ASTM)计算检出限，各物质线性相关系数及检出限、重复性(顶空进样精密度RSD应达到10.0%以内)测试结果如下表：

检测甲磺酸倍他司汀原料药，按照样品前处理方法制备，样品中加标浓度分别为0.2 μg，0.2 μg 加标平均回收率在 88.4%~97.4% 之间。

反相离子对色谱法的反相离子对色谱法的应用

云南红豆杉枝叶中抗癌活性成分：云南红豆杉中抗癌活性物制备工艺研究 方法：利用正交设计试验L9(3~4)确定原料药提取工艺为：10倍量90％乙醇提取两次，第一次40分钟，第二次30分钟；醇提液用10倍量水沉；沉淀加6倍量石油醚40℃脱脂；用1mol／L的NaOH溶液碱洗，除去酸性杂质；以碱性氧化铝柱，以环己烷／丙酮为洗脱溶剂，在环己烷-丙酮(6：4)段富集到所需活性部位，洗脱剂用量为3VB。 结果：富集的有效部位各抗癌成分的含量分别为：紫杉醇：9.45％、三尖杉宁碱：9.63％、10-脱乙酰-巴卡亭Ⅲ：22.64％、总黄酮：19.15％。金松双黄酮对照品的制备 方法：取干燥银杏叶以95％乙醇超声提取3次，提取液合并，减压浓缩，石油醚脱脂后，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，经硅胶柱(6cm×80cm)层析，石油醚-乙酸乙酯(9∶1～5∶5)梯度洗脱，产物用甲醇多次冲淋，再以二甲基甲酰氨溶解，反复重结晶，得**粉末结晶。 结果：HPLC检测含量大于95％，符合对照品的要求；理化鉴别实验均与文献吻合；紫外、红外、质谱、核磁共振的光谱结果均与文献值一致，确定产物为金松双黄酮。云南红豆杉枝叶中总黄酮和金松双黄酮的测定及方法学考察 方法：利用高效液相(HPLC)和紫外分光光度法，分别测定云南红豆杉枝叶中总黄酮和金松双黄酮的含量。 结果：在波长272nm处测定，云南红豆杉枝叶中总黄酮的线性范围为12～28μg／ml，范围内线性关系良好(r=0.9992)，平均加样回收率96.04％(RSD为2.7％)，总黄酮的平均含量5.01％；金松双黄酮的线型范围为：0.88～4.4μg／ml，进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。

如何通过紫外可见分光光度法测定阿司匹林原料药中的水杨酸含量

仪器与试药

1．1 仪器 美国HPll00高效液相色谱仪，VWD紫外一可见光检测器，HPl 100化学工作站，Rheodyne手动进样器，日本岛津UV-265FW自动记录分光光度计，SB3200超声波清洗器。

1．2 试剂 乙腈、甲醇均为色谱纯，磷酸、醋酸、醋酸铵、四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵均为分析纯，超纯水。

1．3 对照品与样品 鱼腥草素钠对照品(中国药品生物制品检定所，批号为：0247-9601)；鱼腥草素钠原料(上海汉殷药业有限公司，批号为：990701，010301，030101，030301、040101)

2 测定方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Zorbax Cs 5μm，150 mn×4。6 mm；流动相：2mmol/L四丁基氢氧化铵溶液．乙腈(64：36)；流速：1。0mL/min；检测波长：283 nm；柱温为室温；进样量为20 μL。

2.2 色谱条件选择

2．2．1 检测波长及溶剂选择 取鱼腥草素钠对照品，用流动相超声溶解并制成约8μg/mL的溶液，进行紫外扫描。鱼腥草素钠能完全溶解并在283 nm处有最大吸收，故以此波长为检测波长，流动相为溶剂。

2．2．2 柱温选择 取同一样品溶液，于同日分别在室温(22℃)、柱温为42℃下各进样两针，结果鱼腥草素钠的理论塔板数依次为8 898、8 900、8 899、8 899，RSD为O．1%；峰面积依次为168 685、167 633、164 638、167 185，RSD为1．0%。说明柱效几乎不变，柱温对检测无影响，为避免加温对色谱柱的损害，所以采用室温作柱温。

2。3 供试品溶液的制备

取干燥至恒重的鱼腥草素钠适量，精密称定，加流动相超声溶解并稀释成含鱼腥草素钠约为24 μg/mL的溶液，摇匀，即得。另取鱼腥草素钠对照品，同法制备对照品溶液。

2．4 方法学验证

2．4．1 线性关系考察 取鱼腥草素钠对照品，用流动相溶解并稀释制成每1 mL含鱼腥草素钠O．080 1 mg的溶液，即为储备液，精密取储备液o．5，1.0，1．5，2．0，3.0，5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀即得。吸取上述储备液及稀释溶液各20μL注入液相色谱仪，依法测定，每个浓度重复进样2次，记录峰面积。分别以浓度C为横坐标，峰面积A的平均值为纵坐标，求得鱼腥草素钠的线性回归方程：A=1．289 5×10-2C+1．634 2×10-4，r=O。999 9；线性范围为：80．1—1 602μg/mL。

2．4．2 精密度试验 精密吸取鱼腥草素钠对照品溶液，注入液相色谱仪，记录峰面积，RSD值为1．O%(几=6)。

2．4．3 稳定性试验 取同一样品溶液于o，6，20，36，42，66h测定，记录峰面积，鱼腥草素钠峰面积6次测定值的RSD为0．9%，表明样品溶液在66 h内稳定。

2.4．4 重复性试验 取同一批样品(030301)3份，依法测

定，平均含量为100。6%，RSD为1．3%。

2.4.5 加样回收率试验 取已知含量的供试品5份，递增添加鱼腥草素钠对照品溶液适量，依法制备和测定。鱼腥草素钠的平均回收率为99．6%，其RSD为1．0%。结果见表1。

3 样品测定

取鱼腥草素钠原料5批，依法制备供试品溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液进样，用面积外标法计算，并用碘量法测定进行比对，结果见表2。

4 讨论

4.1 检测方法的选择 鱼腥草素钠易溶于热水，在水或乙醇中微溶，极性与对乙酰氨基酚相似，用其滴剂的反相检测方法，以C18(5 I．Lm，4．6mm×150mill)为固定相，不同比例的甲醇．醋酸与醋酸铵缓冲液(pH6。o)为流动相检测，均无峰检出。再将流动相改为不同配比的磷酸．水．甲醇，三乙胺．水．甲醇试验，仍未果。

参考了青霉素的反相离子对色谱法检测后，采用反相离子对色谱法，用短链固定相，C8(5 I．Lm，4．6 mm×150 mm)色谱柱，在流动相中加入反离子试剂四丁基溴化铵，有峰检出，但分离效果差；改加四丁基氢氧化铵，以2 mmol/L四丁基氢氧化铵溶液．甲醇(31：69)为流动相试验，峰型有改善，可保留时间很短(约3。5 min)，见图工(A)。将甲醇改为乙腈试验，效果良好，见图1(B)。试验了不同配比，最终以2 mmol/L四丁基氢氧化铵溶液．乙腈(64：36)为流动相，效果最好。

4．2 反离子试剂的用量与流动相的pH 流动相中反离子试剂四丁基氢氧化铵的用量应控制在1．6—2．2 mol/L。用量低于1．6 mol/L，由于亲和力太低，起不到反离子效果；用量超过2．2 mol/L时，pH值过大，达9。O以上，易损坏色谱柱。经试验，四丁基氢氧化铵的用量在2．0 mmol/L时，pH值为7．2，效果最好。 1　仪器、药品与试剂

岛津LC-10AD泵，SPD-10A紫外检测器，CTO-10A柱温箱，C-R6A数据处理机。

马来酸噻吗洛尔(天津中央制药厂)，马来酸噻吗洛尔滴眼液(天津市售产品)，辅料及中间产物(天津中央制药厂)。

乙腈(色谱纯)，磷酸二氢钠(化学纯)，辛烷磺酸钠(山东禹王实业总公司化学试剂厂)。

2　色谱条件

色谱柱：YWG-C18(10 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相：0.065%辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液[取磷酸二氢钠1.56 g，加水1000 mL,用磷酸(1→10)调节pH至3.50±0.05，加入辛烷磺酸钠0.65 g使溶解，摇匀]-乙腈(70∶30)；流速：0.7 mL·min;检测波长：297 nm；积分仪衰减：0；纸速：1.5 mm·min；灵敏度：0.05 AUFS；柱温：40 ℃，理论板数不低于2 000。

3　实验方法

3.1　色谱条件的选择　经过对不同磷酸盐、不同浓度(0.02，0.01，0.005 mol·L)缓冲溶液与甲醇或乙腈以不同配比(65∶35，70∶30，75∶25)筛选，并对加入不同离子对试剂(己烷磺酸钠及辛烷磺酸钠)，比较其不同浓度(0.085%，0.065%，0.045%)，不同pH条件(pH=3.0,pH=3.5)。最终选择0.01 mol·L磷酸二氢钠缓冲液[用磷酸(1→10)调pH=3.5]配制的0.065%辛烷磺酸钠溶液与乙腈(70∶30)组成的流动相为最佳条件(图1)。另以流动相溶解原料作紫外扫描，最大吸收297 nm为检测波长。

3.2　线性实验　精密取马来酸噻吗洛尔适量(约相当于噻吗洛尔12.5 mg)置200 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。分别精密取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，进样20 μL,以浓度(μg·mL)为横坐标，以峰面积为纵坐标，得到噻吗洛尔的回归方程：

Y=875.19X-137.05　r=0.999 3

结果表明浓度在3.0～11.2 μg·mL范围内，线性关系良好。

3.3　有关影响因素实验　取生产厂提供的马来酸噻吗洛尔中间体噻二唑、唑烷进行实验，均对主峰无影响(图2)。另按滴眼液处方配制空白辅料溶液，在规定的色谱条件下，基本为一直线，对本实验也无干扰。

3.4　精密度实验　精密称取马来酸噻吗洛尔(980102批)适量(约相当于噻吗洛尔12.5 mg)，置25 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，重复进样6次，噻吗洛尔RSD=0.35%,马来酸RSD=0.44%，有较好的精密度。

3.5　加速实验　将原料药980102批及滴眼液980502光照27 d后，实验结果见表1。原料药经光照后比较稳定，色谱图无变化，滴眼液色谱图有明显改变(图3)，杂质峰增多，含量下降。本实验说明，该方法能够反映出样品的变化，可以控制产品质量。

4　样品测定4.1　原料药　取本品(约相当于噻吗洛尔12.5 mg)，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。精密取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为记录仪满量程的10%～20%，再取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍(主成分保留时间应在10 min后)，除马来酸峰之外，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的峰面积。结果见表3。

4.2　滴眼液　精密量取本品1 mL(约相当于噻吗洛尔5 mg)置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1 mL置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度作为对照溶液，照上述方法检查，应符合规定。

5　讨论5.1　实验中流动相比例的调整，以主峰保留时间在10 min之后为宜，马来酸峰与相邻杂质峰基线分离较好。

5.2　方法中规定记录色谱图为主峰保留时间的3倍，是由于原料药中间体噻二唑的保留时间约为26 min，实验中970601批滴眼液中检出该杂峰。

5.3　本实验供试液自然放置24 h后复测，溶液浓度不变，杂质量不增加，比较稳定。

定游离水杨酸含量.方法

紫外分光光度法.结果

水杨酸在1.52～30.4μg/m（r=0.99996）的浓度范围内线性关系良好,平均回收率为100.78%,RSD为1.18%（n=6）.结论

本方法快速、准确、可作为游离水杨酸的检查.关键词

阿司匹林肠溶片

游离水杨酸

紫外分光光度法

阿司匹林肠溶片是一种解热镇痛、抗炎、抗风湿药物,应用临床已有多年的历史,疗效确切.但在检查其游离水杨酸一项时,