9氯吖啶的作用是什么检查-吖啶高氯酸盐
乳酸依沙吖啶溶液
外科用药及消毒防腐药
性状
本品为**的澄清液体。
作用类别
该药品为皮肤科用药类非处方药药品。
适应症
本品用于小面积轻度外伤创面及感染创面的消毒。
规格
500ml/瓶。
用法用量
外用,洗涤或涂抹患处。
不良反应
偶见皮肤刺激如烧灼感,或过敏反应如皮疹、瘙痒等。
禁忌
对本品过敏者禁用。
注意事项
1.使用后请拧紧瓶盖,以防污染。
2.该药品见光容易分解变色,应避光保存。
3.该药品仅供外用,切忌口服。
4.用药部位如有烧灼感、瘙痒、红肿等情况应停药,并将局部药物洗净,必要时向医师咨询。
5.对该药品过敏者禁用,过敏体质者慎用。
6.该药品性状发生改变时禁止使用。
7.请将该药品放在儿童不能接触的地方。
8.儿童必须在成人监护下使用。
9.如正在使用其他药品,使用该药品前请咨询医师或药师。
药物相互作用
1.该药品不应与含氯溶液、氯化物、碘化物、苯酚、碘制剂以及碱物等配伍应用。
2.如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用,详情请咨询医师或药师。
药理作用
乳酸依沙吖啶为消毒防腐剂,能抑制革兰阳性细菌,主要是球菌。
贮藏
避光,密封保存。
如何用PCR技术检测结核杆菌
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结核杆菌可以导致全身性疾病,特别是在发展中国家,其发病率较高,危害性极大.近几年结核杆菌的变异性较大,对抗痨药物的耐药性增加,从而使结核病的发病大幅度增高.虽然传统的涂片抗酸染色、细菌培养以及胸片检查对大部分结核能作出正确的诊断,但对某些病人亦可造成误诊或漏诊;动物接种虽特异性较高,但因时间较长,不能满足临床快速诊断的需要.近几年也出现了几种快速诊断方法,但也存在较大的缺陷,如短期培养后抗原免疫原性分析,即用放免方法或酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BACTEC培养瓶中被培养标本所分泌的抗原,该方法可在BACTEC瓶本身鉴定出细菌之前,结合ELISA和涂片抗酸染色有效地鉴别典型和非典型分枝杆菌,敏感性较高,但存在培养时间长,重复性尚差的缺点.另一种是短期培养后核酸探针杂交法,即用特异性DNA探针与BACTEC瓶中培养的细菌染色体DNA杂交.该方法能有效地防止培养的假阴性结果,但却易发生假阳性结果,加之采用的方法较为复杂和繁琐,又有涉及同位素操作之嫌等,因而近来已较少应用.上面两种方法都要借助细菌培养来进行,虽然在时间上比传统培养大大缩短,但缺乏快速诊断的优势.近几年兴起的PCR方法基本实现了快速、灵敏、准确地诊断结核的目的,并且该方法正趋于常规化地应用于临床一般实验室.应用PCR方法检测结核杆菌的首要条件是设计一对特异性DNA引物.该引物所引导的DNA扩增序列应是结核杆菌独有的,且是结核杆菌的保守序列,这样才能保证检测结果的特异性.PCR方法的另外几个关键因素是:①DNA提取,即对有限的结核杆菌应尽量地将其DNA完整、全部地提取;②TaqDNA聚合酶的活性;③PCR产物的检测方法,即将PCR产物进行快速、灵敏、安全、准确的检测.
一、结核杆菌DNA的提取
在该技术上,目前仍无一种统一常规化的方法.现有各方法都存在着提取DNA不足的缺点,因此,敏感性受到影响.现在主要的细菌裂解方法是:①蛋白酶K加表面活性剂法;②蛋白变性剂加表面活性剂煮沸法;③反复冻融法;④超声波法;⑤溶菌酶加表面活性剂法.提取DNA的方法主要有:①酚一氯仿提取法:即用酚一氯仿抽提含有裂解菌体的溶液,然后用乙醇从抽提后的溶液中沉淀DNA.有的学者将硅酮加入酚一氯仿中,使水相和有机相的界面更牢固,这样不但能减少抑制因子混入水相,而且使DNA提取量比未加硅酮方法高20%~30%;②Chaotrop-silica法:用二氧化硅(sio2)吸附裂解菌体释放出的DNA,该二氧化硅用70%乙醇洗涤,而后干燥,最后用双蒸水洗脱(55℃).有报道认为该方法可以消除痰中的某些抑制因子.有的学者发现未预裂解的结核杆菌直接煮沸进行PCR的效果与预先处理的相仿,提示结核杆菌不预裂解也可直接进PCR.但加入的菌数应<约1000个,否则细菌蛋白会对PCR产生抑制作用.
二、引物的设计
根据不同型结核杆菌的序列,目前常在下列几种序列内进行引物设计.
(一)编码结核杆菌抗原的基因序列
1.编码65-KDa蛋白抗原的基因序列:结核杆菌65-KDa蛋白抗原为存在于所有分枝杆菌细胞壁中的热休克蛋白,也是一种交叉反应蛋白.所以依据该序列设计合成的引物,PCR能扩增出所有分枝杆菌的靶DNA片段,没有属内特异性.这种PCR较适用于结核病高发区大规模筛选和流行病普查.另外,对65-KDa蛋白基因的PCR扩增产物进行限制性酶切分析(RFLP),也可以准确地检测出结核杆菌的属内归属.
2.编码MPB64蛋白的基因序列:MPB64蛋白为结核杆菌复合群(MTBC,包括人型结核杆菌、牛型结核杆菌、BCG、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌)所特有.根据该蛋白的基因序列设计的引物进行PCR,对MTBC模板DNA显示出高的特异性.
3.编码38-KDa蛋白抗原b(Pab)的DNA序列:该序列仅存在于人型和牛型结核杆菌.采用在此基因内设计合成的引物和探针进行PCR,只能扩增人型和牛型结杆菌的DNA序列,能检出少至10个结核杆菌的纯化DNA.
4.编码32-KDa蛋白的基因序列:32-KDa是蛋白分枝杆菌的一种分泌蛋白,由它的基因序列设计的引物和探针进行PCR,可以特异地检测出分枝杆菌的DNA片段,能检测出50fg的纯化DNA,相当于10个结核杆菌.
5.编码MPB70抗原的基因序列:MPB70为牛型结核杆菌所特有,由该基因序列设计的引物进行PCR,对牛型结核杆菌的检测具有高度的特异性和敏感性.
(二)结核杆菌基因组重复序列
1.克隆DNA序列:目前所应用的DNA序列都是MTBC所特有,拷贝数在10个以上,包括亚克隆重组质粒pPH7301和克隆质粒PMTb4,分别含KpnI-SmaI插入片段和EcoRI-BamHI插入片段.根据这些基因序列设计的引物,其检出限在20个结核杆菌以下.
2.插入序列:结核杆菌的插入序列主要有IS6110和IS986,它们仅见于MTBC.这两种插入序列在基因组中的拷贝数为1--20个,选择插入序列作为扩增的靶序列,可以得到较高的敏感性和特异性.尤其是IS6110,是目前进行临床PCR检测的首选区段.
(三)人型结核杆菌特异序列
mtp40是人型结核杆菌特异性DNA片段,Portillo等选择mtp40作为靶序列,用PCR检测结核杆菌,结果只能扩增人型结核杆菌DNA,敏感性达到10fg纯化DNA量.
(四)分枝杆菌dnaJ基因
该基因为分枝杆菌共有,但种间又存在差别,在该基因序列内设计合成的引物和探针用于PCR检测,能检出50fg的纯化分枝杆菌DNA,相当于10个结核杆菌.并可用于区分结核杆菌和非典型结核杆菌的鉴别诊断.
(五)rRNA序列
用“通用”引物在逆转录酶作用下,将16SRNA逆转录合成cDNA,然后对cDNA进行PCR扩增,检出限达0.1fg化的结核杆菌rRNA.临床标本中少至10个结核杆菌亦可被检出,该方法由于加了一步反转录过程相对增加了难度,临床一般少用.
三、PCR产物的检测方法
通常PCR产物的检测方法是经琼脂糖电泳后,用溴化乙锭染色,然后在紫外灯下观察或进一步采用标记的DNA探针杂交.为了进一步提高检测的灵敏度,现多在引物和探针的标记上进行改进.由于放射性标记物的危害性,现多采用非放射性标记,如生物素、荧光素、酶及化学发光剂.Wilson等在巢式PCR的内侧引物上分别掺入生物素和地高辛配基,这样PCR产物两端就分别带有生物素和地高辛配基.PCR产物上的生物素和附着在微型滴定板表面的生物素蛋白结合,使PCR产物附着在滴定板上,另一端的地高辛配基和加入的抗地高辛配基碱性磷酸脂酶结合形成抗地高辛配基碱性磷酸脂酶偶合物,利用该偶合物405nm的吸收峰做光密度(OD)测定.另外,还可用吖啶酯标记探针进行杂交,用硼酸钠将未杂交的探针分解,然后加入H2O2溶液和NaOH溶液使吖啶酯水解,最后测量吖啶的光通量.虽然这些方法安全、快速、但其敏感性还需进一步提高,操作还需进一步简化.
四、PCR检测结核杆菌的敏感性和特异性
(一)PCR的特异性
PCR特异性的关键首先取决于所选靶序列的特异性.现在常用的靶序列有:①分枝杆菌共有的靶序列,如65-KDa蛋白基因序列;②MTBC特有的靶序列,如MpB64蛋白基因序列、IS6110序列.③人型结核杆菌特异的靶序列,如mpt40序列.引物设计对PCR的特异性也至关重要.引物序列在靶DNA上的专一性、以及引物的特异性和保守性,以及引物本身的许多特性,如G+C含量引物3'未端序列的特异性和保守性及引物长度等都影响PCR的特异性,另外在设计引物时也要防止出现引物间的过多配对,以免形成过多的引物聚合体,造成非特异性扩增.
PCR扩增TB的特异性除上述先决条件外,也与PCR反应本身有极重要的关系.其中退火温度是一个重要因素,退火温度过低时,引物易发生非特异性结合,造成非特异性扩增.由于结核杆DNA中G+C含量高,因此可以适当提高退火温度,以获得更高的特异性.
另外,PCR缓冲液的组成,尤其是Mg2+浓度对PCR的特异性也有较大影响,Mg2+浓度过高,会提高PCR产物的产量,但同时也会增加非特异性扩增.
(二)PCR的敏感性
PCR的敏感性很高,一般可以检测出1~100fg纯化的结核杆菌DNA,相当于1~20个结核杆菌,这种敏感性明显高于涂片法和培养法.PCR还可以检出培养法易发生失败的病例,从而大大提高菌阴结核病的诊断.另外PCR检测TBDNA不受抗痨治疗的影响,可以准确观察抗痨治疗的效果,防止血清学方法所带来的假阴性结果.PCR敏感性受下列因素影响:①扩增靶序列的拷贝数.一般认为,结核杆菌染色体中含靶序列拷贝数越多,PCR敏感性越高,如38-KDa蛋白的基因序列在结核杆菌染色体中只有一个,而IS6110序列的拷贝数却有10~12个,结果PCR敏感性后者比前者高100倍;②PCR的循环次数.在一定程度上,PCR循环次数越多,其敏感性就越高,但要合适.因为,循环次数过多会增加非特异性问题,造成结果判断上的失误,产生假阳性结果;③结核杆菌DNA的提取技术.处理标本时首先要富集(如离心)标本中的TB,使单位体积内TB含量变高,从而增加了起始模板数,有利于提高PCR的灵敏性.同时提取过程要尽可能减少抑制成份,并提高DNA的提取率.④PCR产物的检测方法.虽然DNA探针杂交要比直接电泳法敏感性高得多,但步骤繁琐,这也是影响PCR临床应用的原因之一.但一般情况下,直接电泳法的敏感性完全能够达到检测的需要.
五.PCR在结核病临床诊断中的应用
PCR检测结核杆菌的优点决定了它在临床上的应用价值和范围,PCR检测TB的优点主要表现如下:
1.能早期诊断TB菌血症:在TB感染的早期,特别是在TB病灶通过血源性外传播时、及在外周血中存在极少量的TB时,PCR就能给于扩增并确诊.此外,由于外周血中TB的含量甚微,又没有新的病灶形成,因而血清学方法和物理方法均难以达到确诊的目的,而对这类病灶的早期诊断在临床治疗上具有指导意义,因为早期菌血症是较易控制的,并可以防止继发性TB病灶的形成.
2.时间短;PCR检测TB仅需2-4h对于某些培养法难以实施的病例,PCR法则行之有效,同时提高了敏感性和特异性,可以检测到1个TB菌.
3.有利于鉴别诊断:对于肺结核来说,其中的结核球和成人型原发性结核等,经常易于同肺癌的诊断相混淆.病灶中心部位经常出现既未见TB又未见癌细胞的坏区.此时涂片检测常是阴性的.在这种情况下,PCR检测就显得特别有效.它不但可以扩增能着色的活菌,还可以扩增已亡的,但DNA尚未降解的菌,从而确定这样的病灶是恶性还是良性.在许多情况下,TB可以导致脑膜炎、胸膜炎、腹膜炎等.涂片法尽管在诊断上具有直接、简便的优点,但敏感性差就局限了它的诊断范围和实用价值.PCR检测这类标本,可以说极其有效.其极高的特异性和敏感性可以很容易地确定TB性脑膜炎及TB性胸腹水.另外,对于肾结核、泌尿生殖系统结核的诊断,PCR都可以予以完成.
4.抗痨治疗的评价:对于抗痨治疗效果的评价,以前的方法显得软弱无力.而PCR法则可以通过定期检测,采用定量PCR法确切地评价抗痨药物的疗效及残存菌的数量和活性度.在体内一般情况下,细菌后,其蛋白系统很快崩溃,而DNA则能相对较长时间地保存下来.这些DNA在某种情况下又会复活.所以,细胞的亡最可靠的评价指标是其基因DNA的完全降解.特别是在许多问题未搞清楚以前,更应该以DNA的降解来判定病原体的与活.从理论上讲,PCR扩增结果将是最可靠的疗效评价指标.
5.修正以往所谓“正确”的观念:致病菌与机体的防御系统是一对激烈的矛盾,致病菌可以以任何方式和通路打击人体的防御系统,以便其生存和繁殖.在健康人群和周围环境中都携带或存在有大量的TB,但何时何地才会造成机体致病呢?以往认为TB很少存在于外周血,这主要是因为外周血中查不到TB,或TB已被局限在肺组织中.但很难让人相信的是,肺部血管极其丰富,淋巴组织和血管网共同构成人体的细胞外液贮存和交换的场所.所以,二者之间的交换是经常的.这种交换就包括能透过毛细血管壁的致病菌.当然,对于TB来讲,大多数细菌将被机体的免疫器官禁固起来.但仍有不少“漏网之鱼”,只是以前所用的方法敏感性及特异性均不够.但在某些情况下,如情绪低落、过度劳累、感冒等情况下,机体防御系统功能减弱,就会造成致病菌的攻击发生疾病.所以PCR技术对于评估临床疗效、疫情的检控、发病机理的探讨均有十分重要的意义.
六、PCR在检测TB中的注意事项
PCR如操作不严格会出现假阳性和假阴性结果.
发生假阳性最常见的原因是:样品间的污染和扩增产物的污染.样品间的交叉污染最易发生在样品的处理过程之中.如大家共用一个加样器、剪刀、位置等,因此在处理活检标本时,用剪刀剪碎组织块,每个标本用后,剪刀应在火上烧数分钟,以彻底清除污染在剪刀上的DNA.对于液态标本的处理,尽可能在同一管子内处理.用具应为一次性的.要解决好扩增物的污染,最佳的方式是减少操作的时间,简化操作手续并使用一次性离心管及接头.因为扩增产物的量一般很高,易于污染实验室任何地方.所以减少打开反应管的次数会降低假阳性的发生率.
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别名 臭艾、小香草、荆芥七。 来源 为芸香科植物芸香Ruta graveolens L.的全草。 植物形态 多年生草本,高可达1m,有强烈气示。全株无毛,有腺点。叶互生,2~3回羽状复叶,全裂至深裂,长5~15cm;裂片倒卵状长圆形或匙形,长1~2cm,全缘或微有钝齿。聚伞花序顶生或腋生;花金**;萼片4~5;花瓣4~5,边缘细撒裂状;雄蕊8~10;心皮3~5,上部离生;花盘有腺点;蒴果4~5室,成熟时开裂。种子肾形,黑色,花期春季。 我国南部多有栽培。 采制6~7月采收,阴干。 化学成分 含桉叶素、芳樟醇、莰烯、柠檬烯、对聚伞花素、芸香碱(graaveoline)、茵芋碱(skimmianine)、香草木宁碱(kokusaginine)、加锡弥罗果碱(edulinine)、山小橘碱(graveolinine)、佛手柑内酯、补骨脂素、花椒毒素(xanthotoxin)、伞形花内酯、东莨菪素、异虎耳草素等。 性味 性寒,味苦、辛。 功能主治 祛风,退热,利尿,活血,解毒,消肿。用于感冒发热、风湿骨痛、小儿惊风、小便不利、泄泻、疝气、跌打损伤、热毒疮疡、湿疹。 臭草 (《生草药性备要》) 异名臭艾(《广西中药志》),小香草(《广西植物名录》),荆芥七(《广西中草药》)。 来源为芸香科植物芸香的全草。 植物形态芸香(《晋成公子安集》) 多年生草本,高可达1米,有强烈气味。基部木质化,全株无毛,有腺点。叶互生,2~3回羽状复叶,全裂至深裂,长5~15厘米,裂片倒卵状长圆形、倒卵形或匙形,长1~2厘米,全缘或微有钝齿。聚伞花序顶生或腋生;花金**,直径约1~2厘米;萼片4~5,细小,宿存;花瓣4~5,边缘细撕裂状;雄蕊8~10,花初开时与花瓣对生的4枚贴伏于花瓣上,与萼片对生的4枚较长,斜出外露,盛开时全部雄蕊并列一起且等长;心皮3~5,上部离生;花盘有腺点。蒴果4~5室,成熟时开裂。种子肾形,黑色。花期春季。 我国南部多有栽培。 采集6~7月采收,阴干。 化学成分全草含挥发油,内含壬酮-2,十一酮-2,壬醇-2,十一醇-2和它们的乙酸酯,桉叶素,α-和β-蒎烯,芳樟醇,莰烯,樟脑烯,柠檬烯,对聚伞花素等。还含生物碱:芸香碱,香草木宁碱,茵芋碱,6-甲氧基白鲜碱,加锡弥罗果碱,山小橘碱,γ-崖椒碱,芸香宁碱,芸香吖啶酮,N-甲基坡拉特德斯明,日巴里尼定,芸香里尼定和它们的季铵离子,2-(4-(3,4-甲二氧基苯)丁基)-4-喹诺酮等。又含黄酮类芸香甙 及香豆精类:佛手柑内酯,补骨脂素,花椒毒素,伞形花内酯,东莨菪素,异虎耳草靠,芸香马扔,芸香枯亭,芸香扔,异欧芹属素乙,潘当归素。 根含生物碱:芸香吖啶酮二醇及其甲醚,芸香吖啶酮氯,芸香吖啶酮醇氯。还含香豆精类:芸香酚内酯及其甲醚,繸状芸香素,二甲烯丙基脱肠草素,花椒树皮素甲,白当归素,芸香马扔醇,印度榅桲素,印度榅桲甙,苏北壬酮,芸香马扔,芸香枯亭,又含洒维宁。臭草尚含大黄酸等(参见"药理"项)。 药理作用①解痉作用 全草中所含的总碱有解除平滑叽痊挛的作用(以氯化钡引起离体兔回肠的痉挛),以山小橘碱为最强,崖椒碱及一种哇啉类生物碱次之,茵芋碱及香草木宁碱则更次,效力与**碱相当。对大鼠粤氏括约肌,总碱也有解痉作用,茵芋碱及γ-崖椒碱作用较弱。民间用作解痉剂,主要系由于其中所含的香豆精类,如佛手柑内酯及一种发蓝色萤光的未知物、花椒毒素、挥发油等所致。补骨脂素,异虎耳草素、异欧芹属素乙,呋喃香豆精(化学结构未定)、芳香羟基羧酸衍生物皆对兔回肠有解痉作用。白鲜碱、崖椒碱、茵芋碱、香草木宁碱的混合物对大鼠、豚鼠的解痉作用较单个成分强。 ②对子宫的作用 种子的水提取物对豚鼠的离体子宫有兴奋作用,引起流产的成分为挥发油,乃直接作用于子宫肌纤维所致。孕妇堕胎往往引起亡或出现严重反应,故有人认为流产为全身中毒的结果。对催产素所引起的大鼠子宫的收缩,茵芋碱可增强之;而白鲜碱、崖椒碱则削弱之,对自发性子宫收缩则不降低。东莨菪素对药物或激素引起的离体或在位的大鼠子宫的收缩,有解痉作用。补骨脂素对未成熟雌兔,能拮抗雌激素的作用,而与孕激素则有微弱的协同作用;也有报告它对雌性大鼠的性周期并无影响,却能抑制大鼠的精子生成。茵芋碱、白鲜碱、崖椒碱的混合物能降低肾上腺素对豚鼠精囊的作用。 ③对皮肤的作用 呋喃香豆精类的佛手柑内酯、补骨脂素、花椒毒素等均可引起光过敏;即注射或内服此等物质,再以长波紫外线或日光照射,可使受照射处之皮肤红肿、色素增加,甚至表皮增厚;特别是花椒毒素,可用来治疗白癜风(每日口服10~40毫克,或注射20毫克,局部以水银灯或日光照射,如此半月至数月)。呋喃与香豆精并无光敏作用,必需二者成线状环形结合后方有效,完整的内酯环也是必需的。本类中以花椒毒素、补骨脂素作用最强。对白癫风治疗有效者,可见局部皮肤中RNA、DNA含量增高,局部的色素增加,在蟾蜍身上曾证明有酪氨酸酶活性增强,黑色素增加;也有人证明花椒毒素能提高大鼠血清铜水平(黑色素之形成需含铜酶,酪氨酸酶)。本类物质对血浆蛋白质并无光氧化作用,但能吸收紫外线。有人报告花椒毒素对"日照射"损伤有保护作用,服用时期较久,皮肤角化层愈厚愈致密,对日光照射也愈能耐受,内服未见严重副作用,日光照射与皮肤癌有一定关系,曾报道花椒毒素等腹腔注射,可使小鼠的紫外线照射引起皮肤癌增加,口服却有保护作用;但口服的保护作用未被证实。在体外,本类物质有杀灭肿瘤细胞的作用。 ④抗微生物作用 呋喃香豆精类对细菌也有光敏作用:即在这些物质存在时,如同时曝光,可引起细菌亡,这些化合物本身一般并无抗菌作用。在体外试验中,补骨脂素、花椒毒素(100微克/毫升)对人型结核杆菌有抑制作用,伞形花内酯对布鲁氏杆菌有抗菌作用,补骨脂素如与紫外线同用,可灭活某些DNA病毒及RNA病毒。 ⑤其他作用 全草中所含呋喃香豆精,山小橘碱有抗炎及抗组织胺作用。异虎耳草素对大鼠的实验性溃疡有中度的保护作用。茵芋碱对肌肉有麻痹作用,累及心肌可引起哺乳动物的血压进行性下降。
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