吖啶酯化学发光原理和特点-吖啶酯的发光底物

发光剂是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，根据上述发光特点可将发光剂分为荧光素、生物发光剂和化学发光剂三种。常用的化学发光剂有以三种，酶促反应的发光底物的发光剂，直接化学发光剂，电化学发光剂。

发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应在何种环境中进行

HRP 标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰肼,lum ino l) ,或其衍生物如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰肼) , 是一类重要的发光试剂。其结构如图4 所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,在过氧化物酶及活性氧[ 过氧化阴离子(O 2- ) , 单线态氧(1O 2 ) , 羟自由基(OH·) , 过氧化氢(H2O 2)]存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm。

早期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体) ,但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体, 进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物, 在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH2H2O 2) 作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。Kodak Am erliteTM半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的。

化学发光免疫分析法有哪三类

正确答案是：E.碱性或中性。

吖啶酯在碱性或中性环境（pH7～9）（E对）发生化学发光反应，其发光强度与吖啶酯及氢过氧化物浓度成正比。

化学发光免疫分析法根据标记物的种类和发光原理的不同，主要可以分为以下三类：

1. 化学发光免疫分析法（CLIA）

特点：

也被称为直接化学发光分析法或非酶促化学发光免疫分析法。

该方法利用化学发光试剂（如鲁米诺类与吖啶酯类）直接标记抗原或抗体。

发光试剂在发光过程中会消耗标记物，导致发光时间较短，属于闪光型发光，因此通常只能进行一次测量，且重复性较差。

应用：

由于其高灵敏度和特异性，广泛应用于各种抗原、抗体、激素等物质的检测。

2. 化学发光酶免疫分析法（CLEIA）

特点：

从标记免疫分析的角度看，CLEIA应属于酶免疫分析，但其酶反应的底物是发光剂。

操作步骤包括首先用酶对生物活性物质进行标记，然后进行免疫反应产生复合物，复合物上的酶再作用于发光底物，最后通过测定发光信号来进行定性或定量分析。

应用：

常用于提高发光信号的强度和稳定性，从而提高检测的灵敏度。

3. 电化学发光免疫分析法（ECLIA）

特点：

以电化学发光剂（如三联吡啶钌）作为示踪物质标记抗原或抗体。

采用纳米微球为固相载体的分离方式，以三丙胺作为电子供体。

通过电场作用诱导结合标记物发光，发光强度与被测物质的浓度呈线性关系，从而实现超微量物质的定量分析。