吖啶橙染色液试剂-吖啶橙染色试剂盒

用作荧光指示剂，肿瘤细胞及细菌、核酸染色剂及移码突变的诱变剂。

吖啶橙是一种荧光色素，吖啶橙激发滤光片波长488nm。阻断滤光片波长515nm。吖啶橙与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光（即着色特异性），这是由于DNA是个高度聚合物，吸收荧光物质的位置较少，发绿色荧光，而RNA聚合度低，能和荧光物质结合的位置多，故发红色荧光。

怎样将未结合到dna上的荧光染料去除

染色体显带技术：Q带、G带、R带、C带、T带、N带，各带的染色试剂以及在染色体上所呈现的区带特征如下：

Q带：喹吖因荧光染色技术，显示中期染色体经氮芥因喹吖染色以后，在紫外线照射下所呈现的亮带和暗带，一般富含AT碱基的DNA区段表现为亮带，富含GC碱基的区带表现为暗带。

G带：Giemsa带，将中期染色体制片经胰酶或碱、尿素、去污剂等处理后再用Giemsa进行染色后所呈现的染色体区带，一般与Q带相符；

R带：中期染色体经磷酸盐缓冲液保湿处理，以吖啶橙或Giemsa染色，显示与G带明暗相间带型正好相反，所以又称反带；

C带：主要显示丝粒结构异染色质以及其它染色体区段的异染色质部分

T带：又称末端带，是染色体端粒部分经吖啶橙染色后所呈现的区带

N带：又称Ag-As染色法，主要用于核仁组织区的酸性蛋白质染色

核酸硝酸银染色浅可以重复银染吗

碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。

1. 小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法

(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。

(2).去除结缔组织及脂肪，剪碎肿块。

(3).小碎片移入1.20×38mm注射针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。

(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。

(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。

注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。

2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析

(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。

(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。

(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。

3. 完整细胞DNA的PI染色

(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。

(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。

（二）吖啶橙染色

1. DNA和RNA的鉴别染色

利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：

1）试剂：

（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。

Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL

1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P

荧光染料与多少dna结合肉眼可见颜色变化

电泳,核酸需经染色才能显色带型,用核酸染色剂：1、溴化乙锭（ethidium bromide,EB）用核酸荧光染料,嵌入核酸双链配碱基间,紫外线激发,发桔红色荧光.EB-DNA复合物EB发荧光,比游离凝胶EB发荧光强度10倍,需洗净背景即清楚观察核酸带型.若EB背景太深,凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO41h或10mmol/L MgCl25min,使非结合EB褪色, 检查10ngDNA品,EB用于检测单链DNA或RNA,其单链核酸亲力相较,荧光产率相较低.凝胶或电泳缓冲液加入终浓度0.5μg/mlEB,染色电泳程进行,能随观察核酸迁移情况.EB带电荷,嵌入碱基增加 核酸刚性,使迁移率减慢,故宜用于测定核酸量,应电泳凝胶浸入0.5μg/mlEB水溶液10min进行染色.EB见光 易解,应于4℃避光保存,2、吖啶橙（acridine orange,AO）：吖啶橙嵌入双链核酸碱基间,254nm紫外线激发发530nm绿色荧光；通静电与单链核酸磷酸基结合,254nm紫外线激发 产640nm红色荧光.区单链双链核酸,灵敏度别0.1μg0.05μg.吖啶橙染色操作要求严格,应 22℃,0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）避光浸泡30min,搪瓷盘用该缓冲剂4℃脱色夜或22℃脱色1~2.3、银（Ag+）试剂：Ag+与核酸形稳定复合物,用甲醛使Ag+原银颗粒.AgNO3等试剂使聚丙烯酰胺凝胶单链,双链DNA及 RNA都染黑褐色.银染灵敏度比EB染色高200倍左右,比亚甲蓝染色高100~1000倍,于0.5mm厚凝胶,能检测0.5ng RNA,其缺点专性强,能与蛋白质,污剂反应产褐色,且DNA染色定量准确.银与DNA稳定结合,DNA破坏作用,适于DNA 片段收制备.4、亚甲蓝（methylene blue）RNA染蓝色,灵敏度高,且操作间.胶浸泡于0.02%亚甲蓝,10mmol/L Tris-Ac（pH8.3）,4℃放置1~2h,用净水洗5~8h（反复换水）,带型肉眼见,低检测量 250ng.

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吖啶橙染色怎么用于细胞自噬

碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。

小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法

(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。

(2).去除结缔组织及，剪碎肿块。

(3).小碎片移入1.20×38mm针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。

(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。

(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。

注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。

2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析

(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。

(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。

(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。

3. 完整细胞DNA的PI染色

(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。

(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。

（二）吖啶橙染色

1. DNA和RNA的鉴别染色

利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：

1）试剂：

（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。

Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL?

1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P

细胞自噬预实验

化学染色法

1、 试验目的

通过化学染料吖啶橙（acridine orange，AO）染色木犀草素处理后的HepG2细胞判断木犀草素是否诱导HepG2细胞发生自噬。

2、 试验原理

3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl2, 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔**或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。AO也可以渗透进入酸性细胞器，例如自噬溶酶体，发生自噬的细胞经吖啶橙染色，在荧光显微镜下可观察到红**点状体，称为酸性小体，当PH值较低的时候，AO发出红色荧光，且强度与酸性程度相关。所以在AO标记的细胞中，酸性囊泡细胞器结构可以通过荧光显微镜下观察到。