吖啶酯厂家-吖啶酯结构式

1、直接化学发光，标记物为吖啶酯（雅培）或者ABEI（新产业）

2、酶促化学发光，标记物为碱性磷酸酶（厦门波生）或者辣根过氧化物酶（强生）

3、电化学发光，标记物为三联吡啶钌（罗氏）

注：括号内为代表厂家。

简介：

化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

western blot做压片是红灯是不是很重要

1、直接化学发光，标记物为吖啶酯（雅培）或者ABEI（新产业）

2、酶促化学发光，标记物为碱性磷酸酶（厦门波生）或者辣根过氧化物酶（强生）

3、电化学发光，标记物为三联吡啶钌（罗氏）

注：括号内为代表厂家。

简介：

化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

化学发光免疫分析仪中国有几家在生产?都是什么情况?求了解,谢谢!

红灯是为了照明，因为溴化银底片对蓝紫色光较较敏感而对红光几乎无反应，又因为在暗室，你在可见光下才能操作，红光属于可见光。压片现在的技术主要还是根据化学发光法的原理，具体原理如下：（也是网上查资料查出来的，你也可以自己去查）

发光剂是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，根据上述发光特点可将发光剂分为荧光素、生物发光剂和化学发光剂三种。下面主要叙述化学发光免疫技术中常用的化学发光剂或发光底物。

1）酶促反应的发光底物 是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物，目前化学发光酶免疫技术中常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。也就是常常用来标记二抗的HRP和AP。

HRP的发光底物为鲁米诺或其衍生物和对-羟基苯乙酸（HPA）。

AP的发光底物为3-（2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙烷（AMPPD）和4-甲基伞形酮磷酸盐（4-MUP，荧光底物），CDP-STAR。

（1）鲁米诺或其衍生物:

鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，通常以0.1mol/L pH8.6Tris缓冲液作底物液。

要注意是:首先,鲁米诺和H2O2在无HRP催化时也能缓慢自发发光，而在最后光强度测定中造成空白干扰，因而宜分别配制成2瓶试剂溶液，只在用前即刻混合;其次, HRP发光增强剂如某些酚试剂（如邻－碘酚）或萤火虫荧光素酶可增强HRP催化鲁米诺氧化的反应和延长发光时间，提高发光敏感度。

（2）对-羟基苯乙酸（HPA）:

对-羟基苯乙酸（HPA）在H2O2存在下被HRP氧化或氧化二聚体（荧光物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长的荧光，可用荧光光度计测量。

（3）AMPPD:

AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有2-30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，15-60min内光强度保持相对稳定。

（4）4-MUP:

4-MUP被ALP催化生成4-甲基伞形酮，在360nm的激发光的作用下，发出448nm的荧光，用荧光光度计进行测量。

（5）CDP-STAR试剂

CDP-Star是通过dioxetane在碱性磷酸酶的激活作用下以持续的速度发出光信号来进行检测，灵敏度高，发光时间从几分钟开始可以延续数天，所以可多次曝光并对曝光时间进行优化。是目前最快速、最灵敏的化学发光底物，曝光时间只需15-60秒。当在尼龙膜上以1:100稀释在检测缓冲液中时，CDP-Star的光信号可以在15分钟内达到最大并且缓衰减达3天以上。特别适用于检测哺乳动物的单拷贝基因、检测极少量的靶DNA，如制作指纹图谱及法医分析。

2）直接化学发光剂 这类发光剂不需酶的催化作用，只需改变溶液的pH等条件就能发光的物质，如吖啶酯（acridinium, AE）在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。

3）电化学发光剂 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+（图16-7）和电子供体三丙胺（TPA）在阳性电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，成为强氧化剂，TPA失去电子后被氧化成阳离子自由基TPA+，它很不稳定，可自发地失去一个质子（H+），形成自由基TPA.，成为一种很强的还原剂，可将一个高能量的电子递给三价的[Ru(bpy)3]3+使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+.。激发态的三联吡啶钌不稳定，很快发射出一个波长为620nm的光子，回复到基态的三联吡啶钌。这一过程可在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号增强。

3.化学显色法

1）HRP-DAB显色法:

①DAB显色液的配制:按照1mlH2O加显色剂A,B,C各1滴,混匀.

②显色:将适量DAB显色液平铺在Ab2杂交后的印迹膜上,室温放置观察,可出现明显的棕褐色蛋白显色带

③终止:用Tris-HCl缓冲液或水漂洗杂交膜即可终止反应.

2）AP-NBT/BICP显色法：

每片NBT/BICP可溶解于30ml水中，使用前将一片分装在30个 EP管中，每张3×9cm的膜取一管配成1ml即可。将PBST或TTBS洗涤过的膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于NBT/BICP溶液液滴上，并用不透明物体（如报纸）遮挡光线，显色20s后每10s观察一次，至条带明显或有本底出现时将膜揭起置去离子水中漂洗后放滤纸上晾干即可观察与扫描。

4.底物化学发光ECL（一些具体操作）

（1）HRP-ECL发光法：

将A、B发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于A、B混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5min左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中1-2min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定Marker，进行分析与扫描。

（2）AP的发光自显影：

AP的发光底物是金刚烷二氧丁环磷酸盐（AMPPD），它含有磷酸酯键在AP的作用下水解下一个磷酸，进而由分子内过氧键提供能源分解产生金刚酮和激发态的甲基间-氧苯甲酸阴离子，当此阴离子恢复到基态时发出光子。可用波拉黑白片（621型）直接暴光显影。显影信号强度比BCIP/NBP显色法强两上数量级。是很前景的显示体系。

5.其他

酶促反应比同位素安全且快速，已经成为Western Blot的主流检测方法。酶促反应可以搭配不同的底物从而实现不同的显色方法：化学发光Chemiluminescent和底物显色Colormetirc/Chromogen，前者灵敏度很高——随着各大厂家努力开发研制灵敏度更高的发光底物，化学发光法的灵敏度已经达到pg级别，甚至还有 Femto级别的，灵敏度超过了同位素；而后者由于直接显色而操作简便且成本低。最为大家熟悉当数辣根过氧化物酶HRP（Horseradish Peroxidase，属于过氧化物酶POD类）和碱性磷酸酶AP（Alkaline Phosphatase）：

一、HRP：

HRP 辣根过氧化酶是最常见的酶促发光或显色的交联酶，由于HRP比活高、特异性更强、分子量小（40kD）、稳定和作用底物范围广的优点而得到广泛使用。HRP的底物种类有不少，主要可以分为化学发光底物和生色底物2大类:

1. 化学发光底物：

化学发光底物主要考虑的是：发光信号强弱——发光信号当然越强越好，强发光信号持续的时间——也是越长越好，还有就是背景低灵敏度高。

Luminol是经典的HRP化学发光底物。GE Healthcare（原安玛西亚）的ECL堪称是经典。

除了拥有王牌产品ECL的GE公司，化学发光底物方面不得不提到Pierce公司。Pierce拥有世界上最优秀的HRP化学发光底物生产技术——世界上许多知名的化学发光底物试剂盒厂商都采用PIERCE提供的化学发光底物作为生产原料。其中最耀眼的璀璨之星是SuperSignal系列。

SuperSignal灵敏度高（有10{-12}g级，10{-14}g级，10{-15}g 级选择），发光持久（6-24小时），可反复曝光，稳定性好（室温贮藏6个月，4℃至少是12个月），节约抗体（由于灵敏度高，一抗二抗稀释倍数是同类产品的10倍以上，这对于宝贵一抗来说十分重要）。

2.生色底物：

HRP的生色底物显色有DAB，4-CN ，CN/DAB，AEC和TMB等（而得到可溶性产物的底物如OPD，ABTS等则适用于ELISA）中，与化学发光法中的酶促基团发光不同，底物显色主要是利用底物在有HRP和过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化积累这一过程检测WB的结果。

最熟悉的底物应该是3’3′二氨基联苯胺DAB，DAB可以和HRP作用形成褐色不溶性产物，灵敏度高，特异性好，缺点就是需要现配现用，显色后光照数小时会褪色，不能永久保存，需要拍照记录，而且有毒。

二、AP：

Western Blot检测系统中常用交联酶两大家族中的另外一类就是AP——碱性磷酸酶。碱性磷酸酶很早就被用于检测系统——包括固定化抗原（WB）检测和核酸检测。

但是做过AP实验的经常会遇到膜上显色背景偏高的问题，所以就WesternBlot本身来说偏爱HRP的要比AP多——分子克隆III解释说由于在我们常用的封闭剂：脱脂奶粉和牛血清白蛋白BSA中富含AP，这样当然显色背景会高。所以分子克隆III推荐的AP适用封闭剂是6%的酪蛋白+1%聚乙烯吡咯烷酮+10mmol EDTA 65度加热一小时确保AP失活后再用于封闭。

一些研究的样本自身也含有较高水平的碱性磷酸酶，虽然实验上很容易实现抑制内源AP影响，但实际上容易被忽略。AP显色底物生成的产物主要是蓝紫色，成像性好容易拍照。早些年前，AP检测的灵敏度比HRP高，但是背景也偏高，整个显色过程更有“技术性”，有许多个人技巧在里面，让人取舍两难。

如今由于HRP的化学发光底物已经不断改进而使得灵敏度不断提高，化学发光显色上HRP和AP不相上下，但是生色反应来说，AP显色的灵敏度还是比一般的HRP显色底物要高。

AP作为一种经典常用的显色交联酶，自有其优点，比如AP的底物显然更稳定，不像HRP那样需要新鲜配制的H2O2一类的不稳定成分，作为试剂盒可以保存时间更长，特别是习惯用显色方法检测WB结果的。就像HRP可以用于化学发光和底物显色一样，AP也有这两种常用的检测方法的不同底物。AP显色的灵敏度就已经可以达到低皮克级，前提是封闭要做得好。常用的是BCIP(5-Bromo-4-Chloro-3’-Indolyphosphate p-Toluidine Salt) ，NBT (Nitro-Blue Tetrazolium Chloride)和INT。

几乎出显色剂的厂家都会生产到这几种底物，比如Roche的BCIP和INT/BCIP ，Pierce的BCIP/NBT，其中以BCIP/NBT灵敏度最高，显色也比较锐利，成像性比较好，因此也就最常用到。预配的即用型显色底物不存在颗粒性底物，较少产生斑点背景。NEB和Initrogen也有完整的检测试剂盒。

最常用的是HRP+GE healthcare得ECL曝光显色试剂。

化学发光法检测现在普遍吗？目前我国有多少生产化学发光法检测试剂盒的厂家？

现在国产的有：1.深圳新产业（半自动做得一半，最近因全自动上市而日渐兴起）。2.北京源德（半自动设备在国内保有量很大，全自动在12年也上市了）。3.北京贝爱康（国内磁微粒发光法的典范，已经被源德收购）。4.北京科美东雅（半自动处在中游水平，全自动只是全自动加样加上了半自动发光组合而成，不是真正意义上的全自动，目前市场很一般）5.新波（国内时间分辨发光的代表《做时间分辨的还有个广州丰华，但市场表现比不上新波》，乙肝项目国内市场做的非常好，目前被PE收购）。6.郑州安图（安图生物技术基础一般，但是做市场的能力全国一流！设备水平一般，但是参数都做的很牛。目前市场总体做的不错，全自动也即将上市）。7.威海威高（半自动做的很烂，最近上市了200速的全自动，设备很大很漂亮，但是试剂情况以及实际使用情况还不明了，市场总体表现目前一般）。8.北京泰格科信，老牌的发光厂家（其试剂批号很全，甚至有批号但是做不出来试剂！技术水平一般，市场混乱，日益走低）。9.四川迈克（新上市的全自动，但是试剂种类非常少！目前还没有见过用户）。10.另外还有一些如北京大成、河北的康普生（只生产设备）等一些小厂家！

市场总体如此，写的比较简单，详细的可以私信我交流。

国内做链霉亲和素磁珠的哪个厂家的用起来效果好啊？求推荐~~~~

很好啊，普遍认为是替代酶免法的方法学。

1.酶促反应 标记鲁米诺 这种技术国产的基本上掌握了，用96孔板的，和酶免差不多。半自动机器多一些，所谓的全自动是拼接的类似全自动酶免。代表是郑州安图，潍坊康华，北京源德这些

2.磁微粒的 表吖啶酯 通俗叫管式发光，代表是贝克曼、雅培、西门子的设备+试剂，国产的新产业、威高、迈克这些技术还很不成熟，机器返修率吓人，但是试剂便宜很多。

3.电化学发光 目前只有罗氏有，三甲医院里占有率高，相对稳定。但是试剂成本太高。

查厂家去SFDA网站，数据查询，非常方便!

化学发光免疫分析仪中国有几家在生产?都是什么情况?

链霉亲和素磁珠，主要用于IVD工业磁分离全自动化学发光免疫分析及生物医药基础研究中分离生物素修饰成分的复合物。链霉亲和素磁珠用于IVD的磁分离全自动化学发光免疫分析，其悬浮稳定性、磁响应速度、非特异吸附及信噪比、结构/性能的储存稳定性是定性指标，只有这些定性指标同时都满足要求才能适用，才值得考虑其分离效价和其用于单次测试的成本。用于磁分离全自动化学发光免疫分析的链霉亲和素磁珠：进口Dynal、JSR产品应用较多，Dynal分离效价接近JSR产品的两倍，Bangs的产品磁响应速度较慢且非特异性吸附较高；截止2018年8月的国产链霉亲和素磁珠中，仅重庆博蓝鹰生物技术有限公司产品亚型MSP-SAV-Z1测试满足碱性磷酸酶和吖啶酯标记系统要求，且该亚型分离效价与Dynalbeads Myone Streptabvidin T1相当，但该公司另一亚型MSP-SAV-F1仍不能满足化学发光免疫分析要求(该公司同时还推出了两性解离离子交换磁珠用于提取核酸，但此类磁珠对核酸、核苷酸、肝素、硫酸软骨素等物质之间的选择性太差而妨碍其用于IVD)。基础研究分离生物素修饰成分复合物时，进口和国产链霉亲和素磁珠产品通常都能用。链霉亲和素磁珠目前都以质量（mg或g）计量，但不同厂家产品单位质量对应分离效价差异大；针对相同测试/分离对象，以单次测试/分离的成本进行比较更合理，这也是多数厂家的报价依据。考虑对化学发光免疫分析的定性指标是否满足要求，很多国产链霉亲和素磁珠的报价就难以理解。用于细胞分选的链霉亲和素磁珠，通常需粒径较小；粒径太小的磁珠其磁响应速度通常较低。所以，如何减小磁珠粒径从物理原理角度提高分离效价而同时保障磁响应速度不降低、如何降低对蛋白非特异吸附以提高信噪比而保障固定化足够多链霉亲和素从化学角度提高分离效价，是制备链霉亲和素磁珠的两个主要技术挑战。

现在国产的有：

深圳新产业（半自动做得一半，最近因全自动上市而日渐兴起）。

北京源德（半自动设备在国内保有量很大，全自动在12年也上市了）。

北京贝爱康（国内磁微粒发光法的典范，已经被源德收购）。

北京科美东雅（半自动处在中游水平，全自动只是全自动加样加上了半自动发光组合而成，不是真正意义上的全自动，目前市场很一般）。

新波（国内时间分辨发光的代表《做时间分辨的还有个广州丰华，但市场表现比不上新波》，乙肝项目国内市场做的非常好，目前被PE收购）。

郑州安图（安图生物技术基础一般，但是做市场的能力全国一流！设备水平一般，但是参数都做的很牛。目前市场总体做的不错，全自动也即将上市）。

威海威高（半自动做的很烂，最近上市了200速的全自动，设备很大很漂亮，但是试剂情况以及实际使用情况还不明了，市场总体表现目前一般）。

北京泰格科信，老牌的发光厂家（其试剂批号很全，甚至有批号但是做不出来试剂！技术水平一般，市场混乱，日益走低）。

四川迈克（新上市的全自动，但是试剂种类非常少！目前还没有见过用户）。

另外还有一些如北京大成、河北的康普生（只生产设备）等一些小厂家。

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化学发光标记免疫分析法:

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester (A E) ,是有效的发光标记物[ 3 ] , 其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法 ,大分子抗原则采用夹心法 , 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。

发光酶免疫分析法:

从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析( chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同[ 5 ]: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) ,它们有各自的发光底物。