吖啶酯属于电化学发光剂-发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应进行的环境为

答案：B

1.化学发光酶免疫测定以过氧化物酶为标记酶，以鲁米诺为发光底物。

2.吖啶酯是化学发光免疫测定中较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。

3.电化学发光免疫测定中常用的发光底物为三联吡啶钌。

化学发光剂的常用发光剂

答案：A

考点：发光免疫分析中的标记物质及类型。[解析]发光免疫分析中的标记物根据其参与的化学反应不同可分为三类：①直接参与发光反应的标记物，如吖啶酯类标记物；②以催化作用或能量传递参与发光反应的酶标记物，如碱性磷酸酶标记物；③以能量传递参与氧化反应的非酶标记物，如三联吡啶钌标记物。

化学发光免疫分析仪的发光试剂

酶促反应的发光底物

酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物，目前化学发光酶免疫技术中常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。HRP的发光底物为鲁米诺或其衍生物和对-羟基苯乙酸。AP的发光底物为3-（2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙烷（AMPPD）和4-甲基伞形酮磷酸盐（4-MUP，荧光底物）。

（1）.鲁米诺或其衍生物。 鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，通常以0.1mol/L pH8.6Tris缓冲液作底物液。要注意是:首先,鲁米诺和H2O2在无HRP催化时也能缓慢自发发光，而在最后光强度测定中造成空白干扰，因而宜分别配制成2瓶试剂溶液，只在用前即刻混合;其次, HRP发光增强剂如某些酚试剂（如邻－碘酚）或萤火虫荧光素酶可增强HRP催化鲁米诺氧化的反应和延长发光时间，提高发光敏感度。

（2）.对-羟基苯乙酸（HPA)。 对-羟基苯乙酸（HPA）在H2O2存在下被HRP氧化或氧化二聚体（荧光物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长的荧光，可用荧光光度计测量。

（3）.AMPPD。 AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有2-30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，15-60min内光强度保持相对稳定。

（4）4-MUP。 4-MUP被ALP催化生成4-甲基伞形酮，在360nm的激发光的作用下，发出448nm的荧光，用荧光光度计进行测量。

直接化学发光剂

直接化学发光剂不需酶的催化作用，只需改变溶液的pH等条件就能发光的物质，如吖啶酯（acridinium, AE）在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。

电化学发光剂

电化学发光剂是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+（图16-7）和电子供体三丙胺（TPA）在阳性电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，成为强氧化剂，TPA失去电子后被氧化成阳离子自由基TPA+，它很不稳定，可自发地失去一个质子（H+），形成自由基TPA.，成为一种很强的还原剂，可将一个高能量的电子递给三价的[Ru(bpy)3]3+使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+.。激发态的三联吡啶钌不稳定，很快发射出一个波长为620nm的光子，回复到基态的三联吡啶钌。这一过程可在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号增强。

使用吖啶酯标记抗原或抗体的自动化免疫分析仪器设计原理是

HRP 标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰肼,lum ino l) ,或其衍生物如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰肼) , 是一类重要的发光试剂。其结构如图4 所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,在过氧化物酶及活性氧[ 过氧化阴离子(O 2- ) , 单线态氧(1O 2 ) , 羟自由基(OH·) , 过氧化氢(H2O 2)]存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm。

早期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体) ,但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体, 进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物, 在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH2H2O 2) 作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。Kodak Am erliteTM半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的。

直接参与发光反应的标记物是

正确答案是：C.化学发光免疫测定原理。

吖啶酯化学发光法属于化学发光免疫分析，其原理是利用抗原-抗体反应，将吖啶酯直接标记在抗原或抗体上，与待测样本中的相应抗体或抗原结合后，在H2O2和NaOH存在下，可发生化学发光反应，通过光电倍增管将化学发光转化为光子，由光子计数器进行光电转换并进行测定（C对）。

吖啶酯怎么读

直接参与发光反应的标记物主要是具有在化学结构上能产生发光特殊基团的物质。这类物质在发光免疫分析过程中直接参与发光反应，不需要通过催化反应或能量传递来间接发光。根据公开发布的信息，以下是一些直接参与发光反应的标记物：

1. 吖啶酯类标记物

特点：吖啶酯类标记物在化学结构上有产生发光的特殊基团，它们通过起动发光试剂的作用而发光，能够在极短的时间内（如1秒内）完成强烈的直接发光，为快速的闪烁发光。

应用：吖啶酯作为标记物用于免疫分析，其化学反应简单、快速、无需催化剂。检测小分子抗原常采用竞争法，大分子抗原则采用夹心法，非特异性结合少，本底低。此外，与大分子的结合不会减小所产生的光量，从而增加了灵敏度。

2. 其他可能的直接发光标记物

虽然吖啶酯类标记物是最常见的直接参与发光反应的标记物之一，但也可能存在其他类型的直接发光标记物。然而，需要注意的是，并非所有发光标记物都直接参与发光反应，有些可能通过催化反应或能量传递来间接发光。

3. 间接参与发光反应的标记物

酶标记物：如辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP），它们作为发光反应的催化剂或能量传递过程中的受体，通过催化底物发光或参与能量传递来间接发光。

非酶标记物：如三联吡啶钌等，它们可能作为化学反应的催化剂或能量传递过程中的中间体，但不直接参与发光反应，而是通过能量传递等方式影响发光强度。

综上所述，直接参与发光反应的标记物主要是具有在化学结构上能产生发光特殊基团的物质，如吖啶酯类标记物。在化学发光免疫分析中，选择合适的标记物对于提高检测的灵敏度和特异性至关重要

公卫医师实践技能考试辅导：化学发光免疫分析的类型

吖啶酯：ā dìng。

如果吖啶环上的取代基能与吖啶环上的C-9 和H2O2形成不稳定的二氧乙烷（此二氧乙烷可迅速分解为CO2 和电子激发态的N - 甲基吖啶酮，当回到基态时发出光子），则这类取代吖啶化合物可做为化学发光标记物。

根据取代基的不同，常用作化学发光标记物的吖啶取代物分为两类：吖啶酯和吖啶磺酰胺。它们的结构中都有共同的吖啶环。

它们的发光机理相同：在碱性H2O2 溶液中，分子受到过氧化氢离子进攻时，生成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2 和电子激发态的N - 甲基吖啶酮，当其回到基态时发出最大发射波长为430nm 的光子。

吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物应用于化学发光免疫分析，通常采用的体系是Acridinium ester/ H2O2 系统。

即用吖啶酯或吖啶磺酰胺标记抗体或抗原，用HNO3+ H2O2 和NaOH 作发光启动试剂。有些在发光启动试剂中加入Triton X - 100 , CTAC , Tween - 20 等表面活性剂以增强发光。

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化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型：

　（一）化学发光酶免疫测定

　化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒。

　（二）化学发光免疫测定

　化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。

　用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件：

　1.能参与化学发光反应。

　2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。

　3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。

　4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。

　鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。

　（三）微粒子化学发光免疫分析

　该免疫分析技术有两种方法：一是小分子抗原物质的测定采用竞争法；二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅1.0μm，这样大大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量，使反应速度加快，也使清洗和分离更简便。其反应基本过程：（1）竞争反应：用过量包被磁颗粒的抗体，与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育，其免疫反应的结合形式有两种，一是标记抗原与抗体结合成复合物；二是测定抗原与抗体的结合形式。（2）双抗体夹心法：标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式，即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。