吖啶酯标记的化学发光反应体系反应时需要酸性环境-吖啶酯标记方法

2024-11-16 20:02:23

灵敏度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报材料之一。

灵敏度的定义可以理解为体外诊断试剂对待测样本所能检测到的最小量，有两个含义：①最小浓度或含量的变化可以引起检测信号的显著变化；②具有适当的限度检测出区别于零的待测物的最小浓度或含量。

体外诊断试剂的分析灵敏度也称为检测限，指检测方法可检测到的最低检测浓度，即在统计学意义上能与零剂量区别的量。一般用95％可信限计算：重复测定空白样本20次，计算20次反应测得的均值和标准差（SD），以平均值+2SD（夹心法）或平均值-2SD（竞争法）计算出相应的浓度，即为体外诊断试剂的分析灵敏度，也是注册资料所需提供的内容。

1.分析灵敏度评估需要的材料和基本要求：

空白样本的制备：空白样本应不含被测物，但其基质应与带测定常规样本相同。如空白样本难以获得，可采用5%牛血清或人血清白蛋白溶液，或根据具体项目选择相应基质的样本，但是需要注意的是，要将基质效应减到最小。

2.实验方法：

在一次运行中重复测定空白样本20次。

3.数据处理：

1）数据记录：将结果记录于表格。如果检测系统对于低于零的报告为零，应记录初始响应值。

2）数据统计：计算20次平均值和标准差SD

3）标准差计算公式：

4）结果报告：

分析灵敏度 =?平均值+2SD（夹心法）或平均值-2SD（竞争法）

体外诊断试剂的功能灵敏度与精密度相关，是以天间变异系数（CV）为20%时所对应的检测限样本具有的平均浓度。

1.计算方法：

1）将低值样本倍比稀释后重复测定10次以上，计算每个低值样本检测信号的均值、标准差和变异系数（CV），选择CV大于 20％时所对应的低值样本平均浓度，这就是体外诊断试剂的功能灵敏度。

2）计算均值：

3）计算标准差：

4）计算变异系数：

1）抗原和抗体的亲和性：两者的亲和性越高，灵敏度越高。

2）抗体的标记方法：标记信号物的放大效应可以提高灵敏度，如化学发光、胶体金、胶乳标记等。

3）抗原抗体反应时间：反应时间的适当延长，可以使抗原抗体的结合反应达到反应平衡，进而灵敏度也提高了。如在化学发光免疫诊断试剂中，抗原与抗体在液相中充分混合至少反应10分钟以上，有时还需要震荡反应以提高反应速率，这样比较容易获得较高灵敏度。

4）包被抗体与标记物的量：在达到反应平衡的条件下，可以适当增加包被抗体和标记物的浓度，来提高灵敏度。如NC膜上的包被抗体、胶体金标记抗体，微球标记的抗体等。但NC膜的抗体吸附量有限，可以通过优化标记来提高灵敏度。微球是以公家偶联的方式与抗体结合，其灵敏度较高于胶体金。

1）选择灵敏度更高的表标记材料：胶体金是常用的标记物，但由于其具有较低的发光强度及较少的抗体吸附量，限制了胶体金免疫层析方法的灵敏度。而与抗体共价结合的材料，如镧系元素，量子点，吖啶酯，胶乳微球等，有利于提高体外诊断试剂灵敏度。

2）发展信号放大系统：免疫层析技术灵敏度不高的原因主要是T、C线位置标记物信号不强，可以根据这一不足，优化放大系统的反应条件。有研究表明，通过添加银增敏剂到胶体金免疫层析试剂条NC膜的方法可以提高检测灵敏度10-100倍。另外，改变胶体金颗粒的大小，也可以提高灵敏度

3）浓缩样本：通过浓缩的方法增加样品的浓度，以提高体外诊断试剂的灵敏度10倍左右。

4）选择优质的试纸条：如在胶体金免疫层析检测方法中，不同的NC膜具有不同的孔径、疏水性、亲水性及其他性能的不同，会导致灵敏度的差异。

5）缓冲液体系：合适的缓冲液体系可以稳定抗原抗体的结合能力及抗干扰能力，因此，合适的缓冲液体系也可以体外诊断试剂的灵敏度。

直接化学发光常用的发光剂是

1、直接化学发光，标记物为吖啶酯（雅培）或者ABEI（新产业）

2、酶促化学发光，标记物为碱性磷酸酶（厦门波生）或者辣根过氧化物酶（强生）

3、电化学发光，标记物为三联吡啶钌（罗氏）

注：括号内为代表厂家。

简介：

化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

化学发光免疫分析仪属于几类仪器

吖啶酯和三联吡啶钌。

吖啶酯是一类可用作化学发光标记物的化学物质，加入发光启动试剂后0.4s左右发射光强度达到最大，半衰期为0.9s左右。

三联吡啶钌其标记物的发光原理是，一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。

吖啶酯怎么读

两类

1.化学发光标记免疫分析法　　

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester (A E) ,是有效的发光标记物[ 3 ] , 其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法 ,大分子抗原则采用夹心法 , 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。

2.发光酶免疫分析法　　

从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析( chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同[ 5 ]: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) ,它们有各自的发光底物。