吖啶橙染色液危害-吖啶橙染色剂的性质

<3.3ng/ml。

细胞角蛋白19片段为肺泡上皮细胞凋亡时，其细胞中含有的角蛋白的碎片降解后变成可溶性物质而进入血液，使血中含量增高，参考值为<3.3ng/ml。

监测非小细胞肺癌的病程和预后，血中CYFRA21-1水平显著升高提示肿瘤的晚期或预后差；如果对非小细胞肺癌的治疗效果好，其水平会很快下降或恢复到正常水平，如值不变或轻度减低提示肿瘤未完全去除或有多发性肿块存在。

扩展资料：

细胞角蛋白检测要求规定：

1、通过化学试剂NaoH、烷基芳香酸以及溴甲酚紫，使牛奶中的体细胞释放脱氧核糖核酸(DNA)而产生凝集，根据凝集的现象来判读体细胞数的相对量。

2、其染色剂配方为吖啶橙0．1%，缓冲液为2%的甲醛和四硼酸钠0.02moI/L，使用前染色液和缓冲液按1：5比例混合，每天随配随用。

3、当牛奶中的粒子通过电极狭缝时，由于电阻增加而改变了原来液体的高电导性，阻力增加，电压上升，产生了一个相当子粒子大小的电脉冲。而脉冲的数量则表示了通过狭缝的粒子数量。

百度百科-细胞角蛋白19片段

细菌有哪些染色方法？

吖啶橙：3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl?, 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔**或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染细胞使之产生桔**荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。

怎样将未结合到dna上的荧光染料去除

一、常用的染色方法有革兰氏染色(最基本)、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等。

二、.1 革兰染色法 （1）取含金**葡萄球菌和大肠埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定;（2）染色:用结晶紫染液染1min，水冲洗;卢戈碘液染1min，水冲洗;0.4%复红酒精溶液染30s，水冲洗;（3）吸干后镜检［2］ 。

1.2 抗酸染色法 （1）取结核杆菌阳性的痰标本（已处理）涂片、干燥、固定。（2）染色:将石炭酸复红染液沸水浴10min，滴加2～3滴覆盖菌膜染色 5min，水冲洗，3%盐酸酒精脱色30s，水冲洗;碱性美兰复染30s，水冲洗。（3）吸干后镜检［3］ 。

1.3 荚膜染色法 （1）取接种肺炎球菌亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定;（2）染色:用石炭酸复红染液染1min，水冲洗;95%酒精脱色5s水冲洗;20%鞣酸溶液媒染10min水冲洗;0.8%孔雀绿溶液染色1min，水冲洗;（3）吸干后镜检［4］ 。

1.4 芽胞染色法 （1）取等量破伤风杆菌厌氧培养菌液和5%孔雀绿水溶液，放入小试管中充分混合，沸水浴20min;取上述混合液涂片、干燥、固定;（2）用 1%沙黄液复染10min，水冲洗;（3）干后镜检。

2.1 革兰染色 镜下，金**葡萄球菌染成紫色、球形，为革兰阳性菌;大肠埃希菌染成红色、杆状，为革兰阴性菌。革兰染色法是细菌学中最经典，应用最广泛的染色法之一。脱色是影响革兰染色的关键步骤，脱色时间长短直接关系到染色结果的准确性［5］ 。脱色过度则革兰阳性菌可能被误染为革兰阴性菌，脱色不 够则革兰阴性菌可能被误染为革兰阳性菌，为此学生难以把握。现将原有四步染色法改为三步法，即把第三步酒精脱色和第四步复红复染合并一步进行，使用 0.4%复红酒精溶液作为复染剂，可达到脱色和复染双重目的。这样，就可以避免学生在四步法中因脱色时间不易掌握而造成染色的失败，减少重复性实验，提高了教学效果。

2.2 抗酸染色 镜下，结核分枝杆菌染成红色，为抗酸菌;背景和其他菌被染成蓝色，为非抗酸菌。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上，用玻片夹夹住涂片以微火烟叶热，保持染液冒蒸汽约5min，此法学生容易使染液蒸干或使染液沸腾，从而影响染色效果和污染环境。改良后的方法是将染液直接加热改为水浴后使用，克服上述的缺点，且染色效果良好。适合实验教学使用。

2.3 荚膜染色 镜下，肺炎球菌菌体染成红色（成双排列），荚膜染成绿色，存在于菌体的周围。传统的荚膜染色是用结晶紫染液染色，菌体染成紫色，荚膜染成淡紫色或无色，菌体和荚膜之间反差小，不易分辨。改良后，增加了脱色、媒染、复染的步骤，使菌体和荚膜之间反差增大，易于观察，可用于学生实验和示教片的制作。

2.4 芽胞染色 镜下，破伤风杆菌的菌体染成红色，芽胞染成绿色。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上并弱火加热，使染液冒蒸汽约5min，此法染液用量大，且容易污染衣物和实验台。现改为菌液和染液混合水浴加热初染，然后制备涂片、固定、复染，即节约时间，染液消耗又少，且菌体、芽胞对比鲜明。此法适用于教学标本片的制作。

三、简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

操作步骤

1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。

2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。

3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。

4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。

5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。

6．干燥

7．镜检

吖啶橙的基本信息

碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。

1. 小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法

(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。

(2).去除结缔组织及脂肪，剪碎肿块。

(3).小碎片移入1.20×38mm注射针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。

(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。

(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。

注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。

2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析

(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。

(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。

(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。

3. 完整细胞DNA的PI染色

(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。

(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。

（二）吖啶橙染色

1. DNA和RNA的鉴别染色

利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：

1）试剂：

（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。

Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL

1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P

女性如何确诊患有滴虫性阴道炎？

简称：AO

AO能与无机酸形成盐，具有绿色荧光。如果再稀释的话，便水解成游离的AO，而呈现紫色荧光。

吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：

（1）细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。将100mg/L溶于PBS的吖啶橙和100mg/L溶于PBS的溴化乙锭各5μl（临用前混合加入，加样量宜小，有时各2μl-5μl足够，量太大容易形成细胞凋亡的假阳性），在照相前混匀后加入，轻轻吹打，30秒后用激光共聚焦显微镜观察照相。（有人用15mg吖啶橙溶于100ml pH6.8的PBS中过滤，避光保存）计取5个视野，共100个细胞中凋亡细胞百分数。

（2）如制成细胞悬液：取100μl PBS稀释的细胞悬液，加2μl的染色液，其中AO/EB，各含100μg/ml，加入染料30秒后观察摄像。

滴虫性阴道炎，由毛滴虫侵入阴道引起。毛滴虫可寄生在妇、尿道、膀胱、肾盂等处，也可寄生在男性生殖道，也可出现在精液中。一般情况下，滴虫不引起症状，但当抵抗力降低，阴道菌群就会失衡，此时则可使阴道发炎。滴虫性阴道炎是威胁女性健康的一个重要杀手，滴虫性阴道炎会严重影响到女性的正常生活，如不注意，可能会产生其他的疾病。患有滴虫性阴道炎的女性应及时到医院检查治疗。那么，滴虫性阴道炎的症状最常见白带增多。急性期时大量的白带有可能湿透内裤，患者因此常常需要使用卫生巾。白带为黄绿色脓样，质稀，有特殊的臭味。外阴瘙痒不如念珠菌引起的明显。常伴有外阴烧灼感、痛、以及尿频、尿急、尿痛的泌尿道症状。但是，仅凭这些简单的症状还是不能确定患者的病情的，需要做科学的诊断，以便采取合适的治疗方法。一般的，需要做的检查有以下几点：1、镜检：在双合诊以前，用消毒棉棒在阴道较深部位取少许分泌物，立即与已滴在玻片上的少量温生理盐水调和后镜检。悬滴法必须在生理盐水冷却之前进行检查，因为滴虫离体时间越久，动力越差，此时滴虫呆滞不动，或仅有鞭毛摆动，这时只能依靠邻近白细胞的煽动状态而推测其存在，有的严重患者在悬滴片整个镜下视野布满白细胞，看不到滴虫，即使看到也不活跃。如遇此情况，可用0.1%沙黄溶液代替生理盐水，因为沙黄能使白细胞染成淡红色，而滴虫不染色，其运动也不受影响，使滴虫在淡红色的背景中显得比较清楚。2、阴道分泌物涂片染色镜检：将标本涂在玻片上，用瑞氏或姬姆液染色镜检，也可检见到滴虫。也可用特殊染色如吖啶橙、天青蓝染色等。3、培养法：如果特殊的病例查不到滴虫，临床上又怀疑患有滴虫的，可改用培养法检查。4、其他方法：近来开始运用荧光标记单克隆抗体检测、酶联免疫吸附法和多克隆抗体乳胶凝集法诊断，敏感度为76-95%不等。一旦检查确诊患有滴虫性阴道炎，一定要积极治疗，否则会造成不孕症等严重后果和无尽烦恼。